染色质重组子Brg1在心肌梗死后心律失常中的作用及分子调控机制

【作者】 马子越； 崔云峰； 王永珍； 伏玉洋； 仝婷婷； 张凯； 韩宇轩； 霍蓉； 班涛；

【机构】 哈尔滨医科大学药学院药理学系； 黑龙江省医学科学院；

【摘要】 背景及目的:心肌梗死（myocardial infarction,MI）后的心脏电生理重构是恶性心律失常的罪魁祸首。研究表明,心肌细胞钠离子通道的主要亚基Nav1.5是心脏的兴奋性和传导性的主要决定因素。心肌梗死后梗死边缘区Nav1.5表达下降,I_Na电流密度降低,心肌传导速度减慢,诱发梗死心脏的折返性心律失常。染色质重组子Brg1 （Brahma-related gene 1）通过调节目标基因转录参与心肌肥厚、糖尿病心肌病和血管炎症等多种心血管疾病的病理发生发展进程,但其是否参与心肌梗死后的电生理重构尚不清楚。本研究旨在探讨Brg1对心肌梗死后心律失常的调控作用,探讨心肌梗死后心脏电生理重构分子机制,为深入了解离子通道的失衡提供实验依据。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型。取材小鼠心脏组织以及采用昆明乳鼠原代心肌细胞构建离体心肌梗死模型,通过Western Blot检测Brg1和Nav1.5的蛋白表达水平;原代培养昆明乳鼠心肌细胞并过表达和敲减细胞内源性Brg1,缺氧12小时后,采用Western Blot技术和qRT-PCR检测Brg1及Nav1.5蛋白和mRNA水平的变化。采用全细胞膜片钳技术检测I_Na电流密度的变化。采用双荧光素酶报告基因检测技术,观察增强或抑制Brg1对SCN5a启动子活性的影响。结果:小鼠心肌梗死后7、14、30天,梗死边缘区心肌组织Brg1蛋白表达显著上调,Nav1.5蛋白表达显著下调。原代心肌细胞中过表达Brg1后,Nav1.5蛋白和mRNA表达明显下调,I_Na电流密度明显减少。敲减内源性Brg1后呈相反趋势。原代心肌细胞缺氧12小时后,Brg1蛋白和mRNA水平显著上调,Nav1.5蛋白和mRNA水平显著下调,I_Na电流密度明显减少,缺氧后敲减内源性Brg1,部分逆转缺氧引起的Nav1.5蛋白和mRNA的表达下调以及I_Na电流密度的减少。应用小干扰RNA和Brg1抑制剂PFI-3,敲减Brg1增加SCN5a启动子活性,过表达呈抑制趋向。PFI-3能够部分逆转Brg1过表达引起的SCN5a启动子活性降低。结论:心肌梗死心肌细胞中Brg1表达增加,Nav1.5表达降低;敲减Brg1能改善缺氧引起的钠通道表达和功能的下降。干预心肌细胞Brg1表达,可影响Nav1.5蛋白表达水平和I_Na电流密度,其调节机制可能与Brg1调控SCN5a启动子活性有关。更多还原