基于分子靶点钩钓技术鉴定苦参碱抗PRRSV作用靶点

【作者】 凌小雅； 孙娜； 孙盼盼； 张华； 尹伟； 范阔海； 孙耀贵； 张振彪； 李宏全；

【机构】 山西农业大学动物医学学院； 山西农业大学实验动物管理中心；

【摘要】 (目的)由PRRSV感染引起的猪繁殖与呼吸综合征严重危害养猪业的发展,课题组前期研究表明,中药活性成分苦参碱具有抗PRRSV的作用,然而,苦参碱抗PRRSV的直接作用靶点尚不清楚。(方法)本研究利用生物素标记苦参碱作为探针,通过qPCR及Western blot等方法评价其抗PRRSV活性及抗炎活性,利用分子靶点钩钓技术富集苦参碱在Marc-145上的结合靶蛋白,通过LC-MS/MS解析苦参碱在Marc-145细胞上的作用靶点,与网络药理学技术筛选出的苦参碱抗病毒作用靶点进行比对,挖掘苦参碱在Marc-145细胞上的抗PRRSV潜在作用靶点,通过数据库构建蛋白互作网络并对潜在靶点进行GO分析和KEGG分析,利用qPCR及Western blot方法检测苦参碱对靶蛋白的影响。(结果)结果表明,ACAT1、ALB、HMOX1、HSPA8、HSP90AB1、PARP1、STAT1为苦参碱的候选靶点,其功能与抗病毒及免疫相关,PRRSV感染诱导HSPA8和HSP90AB1表达显著增加,苦参碱可通过降低HSPA8和HSP90AB1的表达发挥抗PRRSV作用。(结论)说明苦参碱可能通过直接作用于ACAT1、ALB、HMOX1、HSPA8、HSP90AB1、PARP1、STAT1发挥抗PRRSV作用。更多还原