贵州安顺地区烟草病毒病的电镜诊断与RT-PCR鉴定

【作者】 黄敬耀； 张浪进； 刘小茜； 孙鹏刚； 李熙全； 方守国； 章松柏；

【机构】 长江大学园艺园林学院； 长江大学农业农村部长江中游作物绿色高效生产重点实验室(部省共建)； 贵州省烟草公司安顺市公司；

【摘要】 安顺是贵州重要的烟草种植基地之一,其烟草的产量和品质直接影响当地烟草产业的经济效益和广大烟农利益。然而,被称为植物癌症的烟草病毒病每年给安顺烟叶生产造成大量的经济损失,成为当地烟草产业发展的一个重要制约因素。为鉴定安顺烟草病毒病病原,在烟草旺长期,从安顺主要烟区采集呈现典型病毒病症状的烟叶样品共计37份,症状主要包括花叶、蕨叶、明脉、斑驳、疱斑、皱缩、叶缘卷曲、脉坏死、气候斑、叶片变厚肿大等。然后采用汁液负染法于透射电镜下观察病叶样品中是否存在病毒粒子以及病毒粒子形态。随后根据病毒粒子形态对病毒进行简单归类,设计通用引物或特异性引物通过PCR或RT-PCR方法对样品进行检测,检测片段经克隆测序后,与基因数据库比对分析确定病毒种类。结果显示:在透射电镜下,在不同的样品中可观察到线形、杆状、球状和双联体结构的病毒粒子,线形病毒粒子大小多为(12～14) nm×(700～900) nm,少数(12～14) nm×(2 000～2 200) nm,球状病毒粒子大小约为30 nm,杆状病毒粒子大小为(16～18) nm×(300～450) nm,双联体结构的病毒粒子大小为18 nm×30 nm; PCR或RT-PCR的检测显示,双联体结构的病毒粒子为烟草曲叶双生病毒(tobacco leaf curl virus, TbLCV),杆状病毒为普通烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV),球状病毒为烟草黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus, CMV),线形病毒为烟草马铃薯Y病毒病(potato virus Y, PVY)、辣椒脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus, ChiVMV)和烟草病毒1号(tabacco virus 1),其中烟草1号病毒为国内首次发现。更多还原