两种原料药口腔黏膜刺激性试验研究

【作者】 杨坤芬； 廖文平； 郭湘楠； 那敏； 杨宏博； 金天； 谭莹；

【机构】 云南省药物研究所； 云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室；

【摘要】 目的探究如何选择口腔黏膜刺激性试验动物全身麻醉用的麻醉剂,优化麻醉方法;观察和评价云南白药提取物、球药隔重楼根茎提取物经金黄地鼠颊囊给予后对其口腔黏膜有无刺激作用及其程度,为受试物的安全性提供参考依据。方法选择双侧颊囊无异常,一般状况良好的动物12只,随机分成6组,每组2只,雌雄各半。采用异氟烷、水合氯醛和氨基甲酸乙酯不同麻醉剂对动物进行麻醉,1组采用异氟烷吸入麻醉,2-3组采用3.5%水合氯醛(7ml·kg-1、9ml·kg-1)腹腔注射麻醉,4-6组采用20%氨基甲酸乙酯(4ml·kg-1、7ml·kg-1、10ml·kg-1)腹腔注射麻醉,观察动物持续麻醉时间和麻醉效果,选择合适的麻醉剂和剂量。正式试验前,用氨基甲酸乙酯(8ml·kg-1)将动物全身麻醉,选择双侧颊囊无异常,一般状况良好的动物6只,采用随机区组分为2个组:受试物A组和受试物B组,每组3只,全雄。采用同体左右侧自身对比法,左侧给予氯化钠注射液,右侧对应给予配制后的云南白药提取物(0.60 g·ml-1)、球药隔重楼根茎提取物(75.0 mg·ml-1),当天给予4次,0.4 ml·次-1,每次接触5min,每1 h一次(含接触时间)。试验期间评价指标包括:临床观察、给予部位观察和体重,最后一次去除样品后24 h安乐死牺牲动物,取左右侧颊囊组织进行组织病理学检查。结果 (1)采用异氟烷吸入麻醉动物时,麻醉时间约2min,翻转颊囊即刻苏醒;3.5%水合氯醛腹腔给予,7ml·kg-1麻醉维持时间为1h-2h,9ml·kg-1麻醉维持为2h-3h,翻转颊囊易苏醒;20%氨基甲酸乙酯腹腔给予,4ml·kg-1麻醉维持时间为0.5h-1.5h,7ml·kg-1麻醉维持时间为3h-5h,10ml·kg-1麻醉维持时间为7h-12h,方便受试物给予和颊囊翻转、观察。(2)研究期间,各组动物的一般状况、体征均无异常;各组动物每次接触后和重复放置前肉眼观察左右侧颊囊黏膜均无异常;各组动物体重正常增长,未见异常;解剖大体观察各组动物左右侧颊囊黏膜,均未见明显异常;镜下结果显示,各组动物左、右侧颊囊均仅见极少/轻度的血管充血,刺激指数均为0,无刺激性。结论对于口腔黏膜刺激性试验,动物麻醉异氟烷维持时间较短,水合氯醛麻醉效果不稳定,优选20%的氨基甲酸乙酯剂量为7ml·kg-1-10ml·kg-1对金黄地鼠腹腔注射全身麻醉,麻醉可持续时间长,动物不易苏醒,操作性强;云南白药提取物、球药隔重楼根茎提取物与金黄地鼠颊囊多次接触后,均无口腔黏膜刺激性。更多还原