冰片下调DDIT4减轻吉瑞替尼肝脏毒性的机制研究

【作者】 颜皓； 曹雅诗； 徐志飞； 杨晓春； 杨波； 罗沛华； 何俏军；

【机构】 浙江大学药物安全评价研究中心； 浙江大学药学院药理毒理研究所；

【摘要】 目的吉瑞替尼是第二代FLT3/AXL双靶点受体酪氨酸激酶抑制剂,已在多个国家和地区获得批准,是治疗携带FLT3突变的复发性和难治性急性髓系白血病承认患者的标准化治疗。然而在吉瑞替尼的临床应用过程中,会引起频繁且严重的肝脏毒副作用,迫使许多患者中断药物治疗,极大程度限制了其长期临床应用。由于吉瑞替尼引起肝脏毒性的分子机制目前尚未完全阐明,因此无法开展有效的干预治疗。我们的研究以吉瑞替尼临床应用的需求出发,旨在阐明吉瑞替尼肝脏毒性产生的分子机制,并提出精准干预的策略,从而提高吉瑞替尼临床使用的安全性。材料和方法采用C57BL/6J及NSG小鼠构建体内动物模型,通过组织病理学检测、血液生化、western blot、免疫组织化学、腺相关病毒敲低等技术确证吉瑞替尼对肝脏的毒性作用并探索冰片对吉瑞替尼药效及肝脏毒性的影响;采用人正常肝细胞作为吉瑞替尼肝脏毒性的体外研究模型,通过western blot、流式细胞术、qRT-PCR等技术研究吉瑞替尼毒性的发生机制以及潜在的干预靶点和策略。结果 (1)吉瑞替尼肝脏毒性的病理表型为血清转氨酶升高、肝组织结构紊乱、肝细胞空泡样改变和轻微纤维化进展。(2)吉瑞非尼通过转录上调p53蛋白水平,引起肝细胞发生线粒体依赖的凋亡。(3) p53在细胞核富集,转录上调其下游DDIT4,敲低DDIT4可在体内外模型中显著逆转肝细胞凋亡和肝脏损伤。(4)冰片通过下调DDIT4的蛋白水平,有效逆转吉瑞替尼引起的细胞凋亡,缓解血清转氨酶的升高与病理损伤,干预吉瑞替尼肝脏毒性。(5)体内外实验证实冰片不拮抗吉瑞替尼的抗肿瘤作用。结论本研究首次阐明了吉瑞替尼毒性发生的分子机制,发现吉瑞替尼通过调控肝细胞内p53信号,引发DDIT4表达上调,诱导肝细胞凋亡,进而导致肝脏损伤。同时我们证实抑制肝细胞内DDIT4的表达是一种可以缓解吉瑞替尼引起肝脏毒性的有效手段,提出冰片这一传统中药可作为DDIT4的抑制剂、冰片与吉瑞替尼的联合治疗可作为干预吉瑞替尼肝脏毒性的有效策略,为临床上两药联用提供了理论依据。更多还原