异泽兰黄素Eupatilin通过MAPKs/Siglec-15通路抑制破骨细胞分化及牙周炎骨丢失

【作者】 赵博轩； 李婷； 姚汉涛； 季耀庭； 江汉； 杜民权；

【机构】 武汉大学口腔医学院；

【摘要】 目的本研究旨在通过体外细胞模型探究Eupatilin对RANKL诱导的破骨细胞形成的抑制作用,并寻找潜在机制;同时通过体内动物模型探究Eupatilin在小鼠实验性牙周炎中的治疗作用。方法先进行CCK-8实验确定Eupatilin的安全浓度,然后用RANKL诱导破骨细胞前体细胞RAW264.7以及小鼠骨髓巨噬细胞BMDMs分化形成破骨细胞,同时添加不同浓度的Eupatilin处理,通过TRAP染色和F-actin染色评价Eupatilin对RANKL诱导的破骨细胞分化的影响;在牛骨片表面接种BMDMs并用RANKL和不同浓度Eupatilin处理,通过扫描电镜观察骨吸收陷窝来验证不同浓度Eupatilin对破骨细胞骨吸收功能的影响;采用qRT-PCR和Western blot检测破骨细胞相关标志基因mRNA和蛋白的表达;Western blot检测MAPKs和NF-κB通路分子的磷酸化水平;通过RNA-seq筛选差异基因来寻找潜在机制。结果 20μM的Eupatilin没有细胞毒性,且对破骨细胞的分化形成具有显著的抑制作用,同时对相关标志基因Trap、Mmp9、Ctsk等的表达也表现出下调作用。Western blot结果显示Eupatilin显著抑制了RANKL诱导的MAPKs和NF-κB通路分子的磷酸化水平。通过RNA-seq选取差异基因Siglec-15,在RAW264.7中过表达Siglec-15,对Eupatilin抑制RANKL的破骨细胞形成产生回复作用。在Eupatilin处理的RAW264.7中使用MAPKs通路激活剂,挽救了Eupatilin对Siglec-15表达的下调,并回复了其对破骨细胞形成的抑制作用。结论 Eupatilin通过MAPKs/Siglec-15通路对RANKL诱导的破骨细胞分化具有显著的抑制作用;Eupatilin在小鼠实验性牙周炎中也表现出对牙槽骨吸收的有效抑制效能,在牙周炎防治中具有良好的应用前景。更多还原