槲皮素通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB通路缓解鸡毒支原体感染导致的炎性损伤和氧化应激

【作者】 王顺； 金箫笛； 陈昊； 李继昌；

【机构】 东北农业大学；

【摘要】 引言/目的鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）是引起鸡慢性呼吸道病的主要病原体,给家禽养殖业带来巨大的经济损失。目前,抗生素是防治MG感染的主要手段,但兽药残留与耐药性问题日益突出,研发或筛选抗生素替代品具有重要意义。实验室前期通过网络药理学从麻黄鱼腥草散中筛选出一种中药活性成分—槲皮素,本试验旨在研究槲皮素抗MG感染的作用及机制。材料与方法将7日龄白航鸡分为空白对照组（生理盐水）、MG感染组（气囊注射1×109 CCU/mL的MG菌液0.2 mL）、槲皮素治疗组（600 mg/kg槲皮素+MG）,泰妙菌素治疗组（25 mg/kg泰妙菌素+MG）和槲皮素对照组（600 mg/kg槲皮素）,治疗组均连续灌服给药7d,MG感染后第1、4、7 d取肺脏样品。采用鸡胚成纤维细胞（DF-1）进一步验证上述结果,试验分为空白对照组、MG感染组（500 MOI的MG菌液）、槲皮素治疗组（20μM+MG）、泰妙菌素治疗组（50μM+MG）和槲皮素对照组（20μM）,MG感染后4h后给予相应药物,并于24h后收集细胞。采用透射电镜、ELISA、Western Blot等试验方法检测相关指标。结果与讨论HE染色和透射电镜结果显示,槲皮素和泰妙菌素可有效缓解MG感染诱导的DF-1细胞和肺脏损伤。氧化应激试验结果显示,经槲皮素治疗后,氧化应激标记物水平和细胞总ROS水平均得到回调,且相比于泰妙菌素,槲皮素展现出更好的抗氧化能力。ELISA、RT-qPCR和Western Blot结果显示,MG感染可激活TLR2/MyD88/NF-κB信号通路,并显著增加促炎因子IL-1β、TNF-α的表达水平（p<0.05）,抑制抗炎因子IL-4、IL-10的表达水平（p<0.05）,然而槲皮素或泰妙菌素逆转了上述情况,恢复了MG感染诱导的Th₁/Th₂免疫漂移。更重要的是,槲皮素可显著降低肺中MG的定植量（p<0.05）,且在第7 d时与泰妙菌素无显著性差异（p>0.05）。以上结果表明,MG定植于鸡呼吸道并诱发呼吸道炎性损伤是其致病的主要原因,MG可与宿主细胞TLRs受体结合,招募信号分子以激活NF-κB信号通路,引发过度的炎症反应,造成Th₁/Th₂免疫漂移。槲皮素显著降低了鸡肺部MG定植量,明显缓解MG感染诱导的炎性损伤和氧化应激。因此,槲皮素可能是通过抗炎和抗氧化来增强鸡抗MG感染的能力,但其如何清除鸡肺部MG定植量仍有待进一步研究。更多还原