弓形虫感染对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及机制

【作者】 王海论； 黄晓宇； 余春辰； 殷光文； 王登峰； 王磊； 黄志坚；

【机构】 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)福建省动物药物工程实验室；

【摘要】 引言弓形虫感染哺乳动物后会造成一系列的损伤,通常能引起全身性疾病和多器官受损。妊娠母畜感染后可造成流产、死产和早产等结果。在雄性动物上,弓形虫的感染可导致精液质量下降,雄性激素分泌紊乱等。雄性动物的睾丸间质细胞分泌的睾酮主要维持第二性征和促进精子的发生发育,当睾丸间质细胞因感染发生内质网应激时,其睾酮分泌能力明显下降。但其影响睾丸间质细胞睾酮分泌的具体机制尚不清楚。材料与方法本试验运用ELISA、Western-blotting、实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光和流式细胞术等方法,探究了(1)弓形虫感染对小鼠睾丸间质细胞的增殖和睾酮分泌的影响;(2)弓形虫感染对小鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成相关酶表达的影响;(3)弓形虫感染对小鼠睾丸间质细胞内ERS相关蛋白表达的影响。结果(1)弓形虫速殖子与小鼠睾丸间质细胞共培养6小时左右,速殖子开始进入细胞中,细胞内形成明显的纳虫泡。(2)细胞与弓形虫速殖子比例为1:20共培养24小时可以显著增加睾丸间质细胞睾酮的分泌量。通过细胞计数等方法检测后发现,弓形虫速殖子的感染可以显著减少细胞的数量。(3)经RT-qPCR检测发现,弓形虫感染可以显著抑制类固醇激素合成酶StAR、3β-HSD、CYP11A1和CYP17A1的表达。(4)经RT-qPCR检测发现,弓形虫感染可以显著抑制内质网应激蛋白GRP78的表达,对eIF2α和ATF6的影响不明显。(5)流式细胞术结果显示,弓形虫感染可以显著增加细胞凋亡率。讨论本研究通过使用ELISA、Western-blotting、实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光和流式细胞术等技术,探究弓形虫RH株速殖子感染睾丸间质细胞过程中类固醇激素合成酶、未折叠蛋白反应通路相关蛋白的表达变化,揭示弓形虫感染影响睾丸间质细胞睾酮分泌的机制。可以为进一步探究ERS在弓形虫感染睾丸间质细胞过程中的作用提供研究基础。更多还原