表达仔猪腹泻病毒保护性抗原的重组乳酸杆菌的构建及其免疫原性分析

【作者】 郭田田； 王丽； 唐丽杰； 乔新瑗； 姜艳萍； 周晗； 崔文； 李一经；

【机构】 东北农业大学动物医学学院；

【摘要】 仔猪病毒性腹泻是严重危害养猪业的重要疾病之一,以呕吐、水样腹泻、脱水、哺乳仔猪的高死亡率为主要特征。所有日龄猪只均可感染,随日龄增加,死亡率下降。在临床上仔猪腹泻病毒常以混合感染的形式出现,且导致的临床症状和病理变化相似。目前针对仔猪腹泻病毒感染尚无有效治疗方法,主要以疫苗预防为主。上述病毒主要经粪-口途径传播,以肠道黏膜为侵入点引发感染。黏膜系统是机体抵御外来病原体的第一道防线,有效激活黏膜免疫应答是防止病原侵入机体的的理想途径之一。因此,开发能够有效预防多种仔猪腹泻病毒混合感染的多联口服疫苗对于仔猪病毒性腹泻的防控具有重要意义。为了防止病毒的抗原在口服过程中被降解破坏,我们引入活细菌载体系统对抗原进行呈递和保护。作为安全无毒且具有多种益生功能的乳酸菌是活载体系统较好的选择。本研究以常见的仔猪腹泻病毒TGEV,PEDV和PoRV为研究对象,利用乳酸杆菌组成型表达载体pPG-T7g10-PPT,分别构建表达TGEV S蛋白D位点、PEDV S蛋白ps420片段以及PoRV VP4蛋白的重组质粒pPG-T7g10-6Ds、pPG-T7g10-ps420和pPG-T7g10-VP4,以及融合表达上述抗原蛋白的重组质粒pPG-T7g10-6Dsps420-VP4,将重组质粒电转化入干酪乳酸杆菌L.casei 393中,获得重组干酪乳酸杆菌pPG-T7g10-6Ds/L.casei 393、pPG-T7g10-ps420/L.casei 393、pPG-T7g10-VP4/L.casei393以及pPG-T7g10-6Ds-ps420-VP4/L.casei 393。以两种组合对24头新生仔猪进行口服免疫,分别为混合组（pPG-T7g10-6Ds/L.casei393、pPG-T7g10-ps420/L.casei 393和pPG-T7g1 0-VP4/L.casei 393的混合物）以及融合组（pPG-T7g10-6Ds-ps420-VP4/L.casei 393）,并以口服PBS组作为对照组。免疫程序为连续免疫7 d,每天口服免疫一次,剂量为2×10¹¹CFU。免疫后采集并检测各组仔猪血清,鼻拭子和肛拭子样品中的特异性IgG和sIgA水平。结果表明口服免疫重组菌能够诱导新生仔猪产生特异性体液免疫和黏膜免疫应答。为进一步评价重组乳酸菌对新生仔猪的免疫保护效果。我们选择了PEDV进行攻毒保护实验,结果表明仔猪口服重组干酪乳酸杆菌对PEDV的攻击和同居感染具有一定的保护作用。本研究的结果提示乳酸杆菌是口服疫苗的候选载体,并对仔猪病毒性腹泻多联口服疫苗的研发具有一定的意义。更多还原