MDCK悬浮细胞制备及流感病毒敏感性研究

【作者】 李自良； 王家敏； 赵彩红； 王美皓； 李莉； 张雪梅； 李倬； 靳冬武； 马忠仁； 乔自林；

【机构】 西北民族大学生物医学研究中心甘肃省动物细胞技术创新中心； 西北民族大学生命科学与工程学院； 吉林冠界生物技术有限公司； 长春生物制品研究所有限公司； 兰州民海生物工程有限公司；

【摘要】 建立无血清悬浮培养MDCK细胞的方法,分析其传代、线性放大过程中的稳定性及增殖流感病毒的敏感性。运用逐步降血清悬浮驯化法将贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞;进一步分析其生长动力学特性、连续传代稳定性,在5L生物反应器中扩大培养;接种流感和禽流感病毒,测定不同时间HA效价、CCID₅₀滴度,分析其病毒敏感性。成功将ATCC引进的贴壁培养型MDCK细胞驯化为无血清全悬浮培养型MDCK细胞（命名为MDCK-XF02细胞）并冻存;不同接种密度培养MDCK-XF02细胞最大增殖密度均达13.0×10⁶ cells/mL以上,且差异不显著（P>0.05）;连续传代培养过程中细胞形态和生长状况稳定,比生长速率无明显差异（P>0.05）;三个代次的MDCK-XF02细胞以2.0×10⁶ cells/mL接种于5L生物反应器,细胞生长状态良好,倍增时间小于21 h,在批培养中细胞浓度高达14.57±0.47×10⁶ cells/mL,比生长速率分别为0.027±0.012h^-1、0.028±0.013h^-1、0.027±0.013h^-1,差异不显著（P>0.05）;接种甲型流感病毒H1N1和H3N2,HA效价达到6-7 log₂HA/25μL、CCID₅₀达到4.35-4.68 lgCCID₅₀/mL;接种乙型流感病毒B/P和BX-35增殖效果更好,HA效价达到9-10 log2HA/25μL,CCID₅₀达到6.38-7.31 lgCCID₅₀/mL。接种重组禽流感病毒H5亚型Re-5、Re-6、Re-10均能很好的增殖,HA效价达到7-9 log2HA/25μL、CCID₅₀达到6.21-6.96 lgCCID₅₀/mL。本研究获得一株具有自主知识产权的流感/禽流感病毒敏感的无血清悬浮培养型MDCK-XF02细胞株,实现了生物反应器高密度放大培养,为我国开展流感疫苗研究和生产提供细胞基质,也为其他动物细胞悬浮驯化提供参考。更多还原