稳定表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的LMH细胞系的建立

【作者】 孙小娟； 史静柯； 谢泉； 邵红霞； 叶建强； 秦爱建；

【机构】 教育部禽类预防医学省部共建重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室农业部禽用生物制剂创制重点实验室； 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心； 扬州大学农业科技发展研究院； 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室；

【摘要】 鸡传染性贫血病病毒(Chicken infectious anaemia virus,CIAV)感染可引起雏鸡再生障碍性贫血、免疫抑制和全身淋巴萎缩。然而,当前对CIAV感染及其诱导的免疫抑制的致病分子机理知之甚少。在CIAV基因组编码的三个蛋白VP1,VP2及VP3中,衣壳结构蛋白VP1被认为是在介导CIAV感染宿主细胞及诱导产生中和抗体中具有重要的作用。本研究以CIAV毒株CIAV-JS-CZ的基因组为模板,首先构建了pcDNA3.1Hygromycin-VP1重组质粒,并将重组质粒转染至LMH细胞,通过药物浓潮霉素B筛选获得了表达VP1的LMH细胞系。表达VP1的LMH细胞系经过有限稀释法获得单克隆细胞后进一步扩大培养,连续传至15代后进行PCR,IFA以及Western Blot鉴定。鉴定结果发现,PCR能有效扩增出1350bp的VP1特异性目的条带,IFA中可见特异的绿色荧光细胞,而Western Blot中可见VP1特异性条带。以上稳定表达CIAV衣壳结构蛋白VP1的LMH细胞的获得为进一步探究VP1在CIAV介导感染中的作用以及鉴定其潜在宿主互作蛋白提供了一个有力的工具。更多还原