绵羊痒螨兔亚种组织蛋白酶L的分子特征及其重组蛋白的血清学诊断潜能评价

【作者】 王策； 张重阳； 葛优； 蒲善秋； 谢跃； 杨光友； 何冉； 徐璟； 古小彬；

【机构】 四川农业大学动物医学院动物寄生虫病研究中心；

【摘要】 兔痒螨病是由绵羊痒螨兔亚种引起的养兔业中危害较为严重的重要寄生虫病,但目前该病的病原学诊断方法无法有效诊断亚临床症状病例。组织蛋白酶L (CTSL)在寄生虫入侵和寄生虫病的诊断中具有重要作用。课题组在绵羊痒螨兔亚种转录组数据中发现了CTSL (PsoCTSL)的转录本,但尚未见其相关的研究。因此,本研究原核表达了PsoCTSL;实时荧光定量PCR检测饱食与饥饿的痒螨CTSL水平;荧光检测、SDS-PAGE及胶原降解试验分析复性后rPsoCTSL的酶活性;建立rPsoCTSL的间接ELISA方法,并评价其在兔痒螨病中的血清学诊断潜力。结果发现,PsoCTSL的ORF框全长396bp,编码了131个氨基酸残基,具有典型的组织蛋白酶L结构域和特征;该基因经原核表达获得约15.3 kDa的融合蛋白,其能被患痒螨病的阳性兔血清识别;荧光定量结果显示,饱食后螨虫CTSL表达量极显著高于饥饿组螨虫(P<0.001);rPsoCTSL复性后能降解半胱氨酸溶酶体标准底物ZPhe-Arg-AMC,且rPsoCTSL在pH 5.5和40℃条件下酶活性最高,而在中性和碱性缓冲液中或者酶孵育温度高于30℃时相对酶活力不稳定,同时其亦能降解天然I型胶原蛋白;rPsoCTSL-iELISA的敏感性和特异性分别为93.75%(45/48)和93.75%(45/48)。综上,rPsoCTSL能作为兔痒螨病血清学诊断的潜在抗原,其可能在痒螨入侵宿主皮肤表皮层时具有重要作用。更多还原