抗重组IBV S1D蛋白的单克隆抗体的制备与鉴定

【作者】 胡金强； 李益飞； 周继勇；

【机构】 浙江大学动物预防医学研究所；

【摘要】 应用PCR技术克隆了传染性支气管炎病毒三个毒株S1D蛋白基因并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组质粒经PCR和双酶切鉴定正确,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后表达出以包涵体形式存在的融合S1D蛋白,目的蛋白的大小14kD,与预期大小一致。该蛋白通过Ni-NTA亲和层析获得了纯化的目的蛋白。利用纯化的IBV SID蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、筛选、有限稀释法克隆成功获得9株能够分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将获得的杂交瘤细胞注射BALB/c小鼠腹腔,制备腹水。单克隆抗体(mAbs)腹水间接ELISA效价在4.0×10~3-2.05×10~6(纯化抗原的包被浓度为0.2μg/每孔)。除3C6和4G7的重链为IgG2b外,其余的mAbs重链均为IgG1;所有mAbs的轻链均为κ链。蛋白印迹(Western-blot)和免疫细胞化学(ICC)鉴定表明,这些mAbs能够与同源原核表达的S1D蛋白和在vero细胞中表达的S1D蛋白发生特异性反应且具有一定程度的交叉识别。更多还原