禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的分泌表达

【作者】 余祖华； 王红宁； 周生； 黄勇； 柳萍；

【机构】 四川农业大学动物科技学院； 河南科技大学动物科技学院； 四川大学"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台生命科学学院；

【摘要】 根据GenBank已公布的IBV株S1基因全序列设计一对引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5’端不含信号肽序列,3’端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段,克隆到毕赤巴斯德表达载体pPIC9K,并电击转化毕赤巴斯德酵母GS115,筛选获得整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts,重组菌株在1%的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析,结果表明,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76KD,能与IBV阳性血清特异性结合。通过摇瓶培养初步优化了接种量、诱导剂甲醇浓度以及诱导时间等对IBV S1蛋白表达有影响的条件,结果表明,在2%接种量、1%甲醇诱导第3天时重组菌株表达量达到最高水平,表达蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。表达的IBV S1蛋白可作为制备IB诊断抗原、基因工程疫苗的基础材料,对IB的诊断防治有重要的学术价值和应用价值。更多还原