表达禽流感病毒NA1及NA2基因重组禽痘病毒的构建

【作者】 王全英； 乔传玲； 张洪波； 陈化兰；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室； 内蒙古农业大学动物医学系；

【摘要】 从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NA1基因的质粒PMD18-TNA1中切下NA1基因片段,将其亚克隆到pSY538的EcoRI位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的SmaI位点,然后切下同时含有NA1及LacZ基因的片段再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotI位点,从而构建出表达AIV NA1基因的重组禽痘病毒转移载体。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经过蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化、PCR和Western-blot检测等,结果获得了能稳定表达NA1蛋白的重组禽痘病毒。从含有禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/21/02(H9N2)NA2基因的质粒PBD-NA2中扩增出NA2基因片段,将其克隆到PCAGG的SmaI位点,同时将pSY538用EcoRI和BamHI进行双酶切,然后用EcoRⅠ和BglⅡ将NA2基因切下,将其粘端亚克隆到pSY538的EcoRI和BamHI位点,以下同NA1的重组禽痘病毒的构建,结果获得了能稳定表达NA2蛋白的重组禽痘病毒。实验结果表明所获得的重组病毒rFPV-NA1和rFPV-NA2遗传性状稳定,并能够对其重组的单个外源基因进行表达,且在培养细胞中的表达产物具有与AIV蛋白相似的生物学特性。更多还原