H5亚型禽流感病毒血凝素基因在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

【作者】 周迎春； 刘金华； 魏卉玲； 蒲娟； 吴清民；

【机构】 中国农业大学动物医学院；

【摘要】 本研究利用RT-PCR技术扩增了H5亚型低致病性禽流感病毒的血凝素基因,并将其克隆到pGEM-T载体中,利甩Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了含有H5 HA基因的重组杆状病毒rBacmid-HA,用重组杆状病毒转染昆虫细胞sf9,获得HA基因的初步表达,对表达的HA重组蛋白进行Western blot分析、免疫荧光IFA及琼脂凝胶免疫扩散试验。结果表明,所表达蛋白与H5亚型多克隆阳性血清和H5血凝素单克隆抗体发生特异性反应,而与H7、H9亚型阳性血清没有交叉反应,证明重组蛋白HA具有良好的抗原性和特异性。H5血凝素蛋白的成功表达,为将来研究亚单位疫苗、H5血凝素蛋白的结构与功能以及作为诊断抗原制备ELISA抗体诊断试剂盒等奠定了基础。更多还原