禽流感病毒免疫噬菌体抗体库的构建及筛选

【作者】 周庆丰； 马静云； 曹永长； 谢青梅； 陈峰； 毕英佐；

【机构】 华南农业大学动物科学学院；

【摘要】 首先用纯化的H5N1亚型禽流感病毒制备油乳化灭活疫苗,免疫岭南黄鸡,使之产生高免抗体;然后采用RT-PCR技术,从免疫鸡脾淋巴细胞的总RNA中扩增到抗体重链可变区和轻链可变区基因,运用重叠延伸PCR技术将两种抗体可变区基因随机拼结成单链抗体基因,并克隆至M13噬菌粒载体pCANTAB 5E,电转化大肠杆菌TG1,成功构建了库容量为7×10~7cfu的噬菌体抗体库,其重组率达100%,经测序验证,该抗体库具有良好的多样性。用辅助噬菌体M13K07成功对噬菌体抗体库进行了拯救,并以纯化的H5亚型血凝素重组蛋白为靶抗原,对抗体库进行了四轮的筛选富集。挑选淘选后的单克隆菌落,经过以纯化的H5亚型血凝素重组蛋白和H5N1全病毒抗原为包被抗原做ELISA鉴定,成功的筛选到了2株与禽流感H5亚型HA蛋白和H5N1全病毒抗原都能特异性结合的噬菌体单链抗体。本研究为禽流感的诊断和治疗奠定了基础,而且对进一步研究病毒在体内的致病机制提供了有利的工具。更多还原