PIM1通过诱导内皮间质转化促进颈动脉粥样硬化的机制研究

【作者】 薛志伟； 王济潍； 黄斌； 李超； 王东海； 李新钢；

【机构】 山东大学齐鲁医院(齐鲁医院)； 山东省脑健康与功能重构重点实验室；

【摘要】 目的内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化的起始因素,主要由内皮到间质转化(EndMT)引起。EndMT是一种细胞重编程机制,通过该机制,内皮细胞获得间质表型。越来越多的证据表明,EndMT促使动脉粥样硬化病变的发生和进展,并导致斑块不稳定性。然而,在动脉粥样硬化斑块的微环境中引发EndMT的机制尚不完全清楚。方法我们分析了在不同高脂饮食时间段喂养的小鼠动脉粥样硬化斑块的单细胞测序数据。通过定量聚合酶链式反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫组织化学,我们展示了ox-LDL刺激的内皮细胞以及人类和小鼠动脉粥样硬化病变中PIM1的表达情况。将重组腺相关病毒9型通过尾静脉注射到ApoE-/-C57小鼠体内,以探讨PIM1在动脉粥样硬化中的作用。通过免疫共沉淀(Co-IP)验证了PIM1的底物。苏木精-伊红(H&E)染色、油红O染色和Masson三色染色分别用于评估动脉粥样硬化斑块的大小、脂质含量和胶原纤维含量。结果在体内实验中,随着动脉粥样硬化的进展,内皮细胞中PIM1的表达增加。特异性敲除内皮细胞中的PIM1可负调控动脉粥样硬化进程和EndMT过程。在体外实验中,敲降内皮细胞中的PIM1可减弱ox-LDL诱导的EndMT。这一过程主要是由于PIM1的减少导致NDRG1在Ser330位点的磷酸化减少,进而减少NDRG1的核转位。这影响了NDRG1与PTBP1的相互作用,最终影响了波形蛋白(Vimentin)、ZEB1、Slug、Snail、N-Cadherin、TAGLN和α-SMA等基因的mRNA水平。Max-40279能够抑制NDRG1在Ser330位点的磷酸化,从而抑制EndMT过程。结论我们的研究发现了PIM1/P-NDRG1(S330)/PTBP1/EndMT轴作为促进动脉粥样硬化进展的关键因素,并为预防动脉粥样硬化提供了新的策略。更多还原