tiRNA-Val-CAC-002激活FB自噬诱导其活化的研究

【作者】 喻晖乔； 彭慧； 孙磊叶； 吴颖芳；

【机构】 中南大学湘雅医院口腔医学中心；

【摘要】 目的:成纤维细胞(Fibroblast,FB)活化是口腔黏膜下纤维性变(Oral submucous fibrosis,OSF)发病机制的中心环节。本课题组前期研究证实,OSF组织及槟榔碱刺激FB中tiRNA-Val-CAC-002高表达,并且槟榔碱可以通过上调tiRNA-Val-CAC-002促进FB活化。同时有研究表明自噬在调控FB活化促进纤维化疾病进展中发挥重要功能,但tiRNA-Val-CAC-002与FB自噬及活化关系尚不明确。本课题旨在探究tiRNA-Val-CAC-002是否通过调控FB自噬促进其活化进而参与OSF疾病进程,从而完善OSF发病机制并寻求OSF治疗的新靶标。方法:梯度浓度槟榔碱处理FB。Western Blot检测经槟榔碱处理的FB自噬相关蛋白(LC3、P62)的表达。MDC染色法、透射电子显微镜观察经槟榔碱处理的FB自噬小体形成情况。转染tiRNA-Val-CAC-002 mimic/inhibitor,利用Western Blot检测FB自噬相关蛋白(LC3、P62)的表达、MDC染色法、透射电子显微镜观察自噬小体形成情况;在转染tiRNA-Val-CAC-002 mimic的FB中加入羟氯喹(CQ,10μmol/L)抑制细胞自噬,Western Blot检测自噬相关蛋白(LC3、P62)、α-SMA及CollagenⅠ/Ⅲ的表达。结果:Western Blot结果显示:随着槟榔碱刺激浓度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达逐渐增多、P62蛋白表达减少(P<0.05)。MDC染色法显示:槟榔碱刺激后,FB中自噬小体增加,免疫荧光强度增强(P<0.01),透射电子显微镜结果显示细胞超微结构改变,自噬小体增多(P<0.01)。过表达tiRNA-Val-CAC-002可得到与(1)、(2)一致的结果(P <0.05),反之抑制tiRNA-Val-CAC-002则抑制LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达、P62蛋白表达增加(P<0.05),自噬小体形成减少。Western Blot结果显示:通过CQ抑制自噬,P62的表达增加,并可逆转tiRNA-Val-CAC-002作用下的α-SMA及collagenⅠ/Ⅲ蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:tiRNA-Val-CAC-002可以通过激活FB自噬诱导其活化。更多还原