谷子种子带病原线虫的检测方法研究

【作者】 龚珂珂； 李志勇； 刘佳； 马继芳； 张梦雅； 刘磊； 白辉； 董志平；

【机构】 河北省农林科学院谷子研究所农业农村部特色杂粮遗传改良与利用重点实验室(省部共建)河北省杂粮研究重点实验室； 河南科技大学农学院；

【摘要】 由贝西滑刃线虫引起的谷子线虫病是谷子生产上重要的种传病害,应从选种初期进行筛选与防控,切断传播病害的源头,因此对种子进行带线虫检测尤为重要。目前检测谷子种子带线虫的方法主要是对种子进行基因组DNA提取、利用线虫特异性引物进行PCR扩增的分子检测。该方法具有简单便捷的优点,但是实践过程中发现因为提取的线虫DNA占比低,检测容易造成漏检,且由于谷子DNA干扰导致检测条带不易判读。基于此,我们改进了线虫检测方法,包括种子上病原线虫的洗脱、显微镜下线虫计数定量、单条线虫的DNA提取和PCR扩增。主要结果表明,利用60目尼龙膜与医用纱布进行线虫洗脱效果没有明显差别;利用1 mL孢子计数板比普通载玻片进行显微镜下线虫定量更准确;提取单条贝西滑刃线虫DNA的三种方法中,切割冻融酶裂解法和切割酶裂解法优于直接裂解法,小型解剖刀切割线虫效果优于研磨棒,且切割30 s可稳定获得单条贝西滑刃线虫DNA,说明线虫体壁是DNA提取的重要障碍,切割与酶裂解是线虫DNA提取成功的关键因素。该研究为制定谷子种子带病原线虫检测标准、从谷子生产源头控制线虫传播提供了重要技术支撑。更多还原