广东瓜类蔬菜蔓枯病病原菌鉴定

【作者】 韩亚阁； 佘小漫； 汤亚飞； 蓝国兵； 李正刚； 何自福； 于琳；

【机构】 广东省农业科学院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室；

【摘要】 瓜类蔬菜是我国主要的蔬菜种类,也是广东重要的经济作物。本团队前期研究发现蔓枯病是广东瓜类蔬菜上的最常见病害之一,在广东瓜类蔬菜产区广泛发生,田间发病率约为30%,重病田块发病率可达80%以上。前人报道指出引起瓜类蔓枯病的病原菌主要包括Stagonosporopsis caricae、S.citrulli和S.cucurbitacearum 3种,然而广东瓜类蔬菜蔓枯病的病原种类尚不清楚。为明确引起广东瓜类蔬菜蔓枯病的病原菌种类,笔者于2020—2022年广泛采集粤东、粤西、粤北和珠三角地区黄瓜、苦瓜、南瓜和蒲瓜蔓枯病疑似病样,分离获得70个培养形态相似的分离物。从上述4种瓜类蔬菜上各随机选择1个菌株作为代表性菌株,进一步鉴定4个代表性菌株的分类地位,测定其致病力。结果表明,在PDA培养基上25℃下培养,4个代表性菌株菌落形态相似,菌落气生菌丝蓬松,菌落近圆形,边缘不整齐,初期为白色,背面易产生黄褐色色素;培养后期菌落表面易塌陷,正面呈灰褐色,背面产生大量墨绿色至黑色色素。菌落经紫外线照射可在基质表面产生大量分生孢子器和/或子囊壳,成熟后分别分泌大量分生孢子和/或子囊孢子。分生孢子器近球形,顶部有圆形孔口,呈乳状凸起,棕褐色,大小为(86.24～512.84)μm×(63.00～450.56)μm;分生孢子呈圆柱状,两边钝圆,单生,无色,大小为(7.73～15.47)μm×(3.08～6.89)μm。子囊壳瓶形或近圆形,黑褐色,大小为(105.53～377.65)μm×(89.24～289.17)μm;子囊孢子短棒状或梭形,具1个分隔,分隔处稍缢缩,单生,无色,大小为(21.03～33.48)μm×(7.87～12.93)μm。这些形态学特征与Garampalli等(2016)报道的S.citrulli的形态学特征类似。克隆上述4个代表性菌株的核糖体内转录间隔区(ITS)、β-微管蛋白(TUB2)、钙调蛋白(CAL)和几丁质合成酶A (CHS1)基因的部分序列,构建贝叶斯多基因系统发育树,结果表明,4个代表性菌株与6个S.citrulli菌株聚成独立分支,后验概率为0.98。将4个代表性菌株的菌丝块接种至两叶期的黄瓜、苦瓜、南瓜和蒲瓜叶片上,25℃保湿培养16 h后菌丝块周围即可出现水渍状病斑;3d后菌丝块周围出现近圆形、褐色腐烂病斑,病斑直径为(11.00～46.10) mm×(11.00～43.90) mm;后期形成"V"形腐烂病斑,直至叶片完全腐烂,整株枯死。人工接种症状与田间瓜类蔓枯病症状相似。重新通过组织分离法分离获得病健交界处的病原物,其菌落形态与原接种的病原菌菌落形态一致。因此,本研究利用形态学特征结合多基因分子系统学方法和致病力测定,鉴定引起广东黄瓜、苦瓜、南瓜和蒲瓜蔓枯病的病原菌为S.citrulli。据作者所知,这是在国内外首次发现S.citrulli侵染蒲瓜,引起蒲瓜蔓枯病;在我国首次发现S.citrulli引起黄瓜、苦瓜和南瓜蔓枯病。更多还原