泛素偶联酶UBE2C通过调控MMP9蛋白去泛素化影响非小细胞肺癌的进展

【作者】 赵杰； 代娟娟； 王丹丹； 梁超； 武艳；

【机构】 滨州医学院附属医院肿瘤科； 滨州医学院附属医院医学研究中心；

【摘要】 目的:UBE2C作为泛素-蛋白酶体系统的重要组成部分参与许多肿瘤的进展过程,本研究旨在探讨UBE2C调控MMP9在非小细胞肺癌(NSCLC)增殖、迁移中的影响,并阐明其作用机制。方法:通过GEPIA数据库分析UBE2C在肿瘤组织中的表达水平,Kaplan-Meier分析UBE2C表达水平与生存期之间的关系。H1299和H520细胞中单独转染pcDNA3.1,pcDNA3.1-Flag-UBE2C,shMMP9或共转染pcDNA3.1-Flag-UBE2C和shMMP9质粒,实时荧光定量PCR和Western blotting法检测其转染效率。CCK8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖和克隆形成能力,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力。Starbase数据库分析UBE2C和MMP9的相关性。Western blotting和免疫荧光实验检测UBE2C和MMP9的蛋白表达水平。CHX(cycloheximide,放线菌酮)追踪实验检测UBE2C对MMP9蛋白稳定性的影响。采用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)阐明UBE2C和MMP9相互作用及UBE2C调控MMP9的作用机制。结果:GEPIA数据库分析显示UBE2C在肺癌等多种肿瘤中表达上调。Kaplan-Meier分析显示UBE2C的表达水平升高与总生存率(OS)和无进展生存期(PFS)呈负相关。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-Flag-UBE2C组H1299和H520细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力显著上调。Starbase数据库分析显示UBE2C与MMP9的表达水平呈正相关。Western blotting和免疫荧光实验证实上调UBE2C后可以促进MMP9蛋白的表达,并且MMP9蛋白表达与UBE2C表达水平呈剂量依赖性。CHX(cycloheximide,放线菌酮)追踪实验证明UBE2C可以增加MMP9的蛋白稳定性。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验证实UBE2C可以与MMP9发生相互作用,并通过抑制MMP9的泛素化修饰增强其蛋白的稳定性,进而促进MMP9的蛋白表达。与pcDNA3.1-Flag-UBE2C组相比,在pcDNA3.1-Flag-UBE2C组中转染shMMP9质粒后可以部分逆转UBE2C对H1299和H520细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的促进作用。结论:UBE2C在非小细胞肺癌组织中表达上调并与病人生存期呈负相关,并且UBE2C的表达水平与NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力密切相关。此外,UBE2C通过抑制MMP9的泛素化修饰,增强MMP9的蛋白稳定性,从而上调其蛋白表达水平。同时,MMP9在UBE2C调控的NSCLC恶性生物学特征中发挥重要作用。本研究通过探讨UBE2C在NSCLC发生发展中的作用机制,将为以UBE2C为靶点的肺癌治疗提供实验依据。更多还原