重组FGFR1蛋白的制备及对喉癌抑瘤效果的初步研究

【作者】 陈嘉； 李英； 严毛晓； 曹江； 杨蓓蓓；

【机构】 浙江大学医学院附属第二医院； 上海交通大学医学院附属仁济医院；

【摘要】 目的:制备新型靶向药物重组蛋白FGFR1,研究其对喉癌的抑瘤作用。方法:获取编码FGFR1胞外区Ig2和Ig3结构的基因片段,插入真核表达质粒pSectag2A,构建重组质粒pSectag2A-FG FR1,将重组质粒转染HEK-293T细胞系,筛选稳定转染的FGFR1-293T细胞系,重组蛋白FGFR1可被分泌至胞外,收集FGFR1-293T细胞培养基,用镍柱纯化出带有6×His标签的重组FGFR1蛋白,检测重组蛋白FGFR1对Hep-2细胞增殖的抑制作用。结果:pSectag2A-FGFR1重组质粒构建、重组蛋白FGFR1表达纯化及体外抑瘤效果。研究pSectag2A-FGFR1 (Ig2+Ig3)经BamHⅠ/HindⅢ双酶切,电泳可见约5.16kb、591bp条带,重组质粒构建成功。FGFR1-293T细胞经RT-PCR验证,电泳条带大小约591bp,与预期FGFR1 Ig2+Ig3 591bp目标条带位置相符。获得的蛋白FGFR经收集纯化后进行Western Blot检测,抗6×His的抗体测得阳性条带,大小约40kD,蛋白收集纯化成功,鉴定正确。CCK-8结果显示,Hep-2细胞增殖抑制率随着FGFR1蛋白浓度的增加而升高,低浓度咪唑对细胞增殖几乎无影响,但是,高浓度咪唑会影响细胞增殖。去除咪唑后,相应浓度的重组蛋白FGFR1对Hep-2的细胞增殖抑制率为与去除咪唑前的抑制率相近。说明重组蛋白FGFR1对喉癌Hep-2细胞具有增殖抑制作用。结论:成功建立FGFR1-293T稳定转染细胞系,初步验证了其表达的重组FGFR1蛋白能够有效的抑制喉癌Hep-2细胞增殖。更多还原