HSP60及其下游炎症因子在小鼠内耳膜迷路积水模型中的作用机制及甲强龙保护作用的研究

【作者】 王玥； 李霄飞； 唐世雄； 张道宫； 樊兆民； 王海波；

【机构】 山东大学附属山东省耳鼻喉医院； 山东省耳鼻喉研究所； 宁波市第一医院；

【摘要】 目的:梅尼埃病发病机制不明,但普遍认为与内耳膜迷路积水有关。膜迷路积水模型目前是研究梅尼埃病的主要手段之一。热休克蛋白(Heat shock proteins,HSP)是在细菌到哺乳动物中广泛存在一类热应激蛋白质,当受到外界不良刺激时,其表达增多,具有保护作用。本研究旨在检测HSP60在TLR4-NF-κB信号通路上(包括炎症因子IL-6和TNFα)在C57BL/6小鼠内耳膜迷路积水模型中的表达变化及其可能机制,并进一步探索甲强龙对内耳膜迷路积水的可能保护作用机制。方法:采用腹腔注射去氨加压素建立小鼠内耳膜迷路积水模型。C57BL/6小鼠分为四组,分别为对照组(control)、膜迷路积水组(VP组)、积水组给与甲强龙保护组(VP+M组)和单独甲强龙组(M组)。耳蜗切片HE染色观察四组内耳膜迷路积水情况,根据中阶所占蜗管面积评估积水程度。Realtime-PCR和IF分别检测HSP60及下游因子TLR4、NF-κB、IL6、TNFα,在四组内耳的表达变化和表达位置。重点观察部位为螺旋神经节、感觉毛细胞、螺旋韧带、血管纹、壶腹嵴和囊斑。结果:耳蜗切片示VP组出现前庭膜明显凸向前庭阶,提示重度积水。VP+M组仅出现轻度积水,control和M组无积水。Realtime-PCR显示VP组中HSP60及下游因子TLR4、NF-κB、IL6、TNFα在内耳的表达较control下降,差异有统计学意义(P<0.05),VP+M组HSP60、TLR4、NF-κB及下游因子IL6、TNFα表达较control升高,M组表达情况与control无统计学意义。免疫荧光发现HSP60主要表达在正常C57BL/6小鼠耳蜗螺旋神经节、毛细胞、螺旋韧带、壶腹嵴和囊斑,在血管纹中基本不表达。在VP组、VP+M组和M组的表达部位相同,其表达量变化与mRNA水平表达变化一致。结论:本研究表明HSP60在内耳主要结构广泛表达,HSP60及下游因子TLR4、NF-κB、IL6、TNFα在膜迷路积水组降低,可能参与膜迷路积水发病机制;甲强龙可以改善膜迷路积水程度,其机制可能与影响HSP60及其下游因子TLR4、NF-κB、IL-6和TNFα表达变化相关。该研究可为梅尼埃病发病机制的基础研究提供理论依据。更多还原