副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究

【作者】 占利； 徐昌平； 张云怡； 陈鸿鹄； 张政； 陈建才； 张俊彦； 梅玲玲；

【机构】 浙江省疾病预防控制中心；

【摘要】 目的建立一种快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增(RPA)方法。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过稳定性实验和实样检测评价方法的应用效果。结果建立的实时RPA方法能在39℃恒温下20min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度副溶血性弧菌DNA模板及大肠杆菌DNA模板隔日三次实时RPA检测结果一致,51件实际样品检测结果与GB 4789.7-2013方法完全一致。结论建立的实时RPA方法能够在20min内灵敏、特异的进行副溶血性弧菌定性检测,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。更多还原