大会交流2:circ＿0001982调控miR-143-3p在代谢综合征胰岛素抵抗中的作用与机制研究

【作者】 林细华； 朱伊祎； 杜颖； 唐圣洁； 桂薇薇； 李红；

【机构】 浙江大学医学院附属邵逸夫医院内分泌科；

【摘要】 目的:环状RNA（circRNA）是一类非编码RNA分子,可作为microRNA （miRNA）的海绵,竞争性结合miRNA后解除其对靶基因的抑制,参与调控多种疾病的发病过程。在代谢综合征患者血清中miR-143-3p高丰度表达,并促进胰岛素抵抗,该作用是通过miR-143-3p被脂肪细胞内吞后作用于其靶基因IGF2R的3’-UTR发挥基因沉默效应,并抑制胞内胰岛素下游经典的信号通路PI3K-Akt的传递引起。本研究拟筛选可调控miR-143-3p的circRNAs,分析其在代谢综合征中的表达情况及功能并验证其对miR-143-3p的调控作用和具体分子机制。方法:通过生物信息学及circRNA相关数据库寻找到潜在调控miR-143-3p的12个circRNAs,qRTPCR方法验证并筛选其中差异最大的circRNA—circ₀001982,分析其与miR-143-3p的具体结合位点;然后在MetS患者的血清及尿液样本和高脂饮食喂养诱导的肥胖胰岛素抵抗模型小鼠（DIO小鼠）的皮下脂肪组织中检测其表达情况;SiRNA敲低circ₀001982后利用荧光标记2-脱氧葡萄糖即2-NBDG实验方法检测对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响;然后通过一种高效的靶向miRNA回收鉴定技术—miRNA体内沉淀实验（miRIP）来验证circ₀001982是否可直接与miR-143-3p结合;最后用Westernblot的方法检测敲低circ₀001982后miR-143-3p下游靶基因IGF2R及下游胰岛素信号通路PI3K-Akt蛋白的表达情况。结果:StarBase&circBase预测及RNAhybrid分析发现circ₀001982存在一个miR-143互补结合位点,且circ₀001982在MetS患者的血清及尿液样本中均表达减低,在DIO小鼠皮下脂肪组织中的表达明显低于对照组小鼠;2NBDG实验发现敲低circ₀001982能使诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取减弱;MiRIP实验发现miR-143-3p探针组可以富集到的circ₀001982约是阴性探针对照组的4倍,初步证实circ₀001982靶向结合miR-143-3p;Westernblot实验发现敲低circ₀001982后抑制miR-143-3p靶基因IGF2R及下游胰岛素信号通路PI3K-Akt的蛋白表达。结论:在MetS及DIO小鼠中低丰度表达的circ₀001982可能与胰岛素抵抗相关,该效应的可能机制是circ₀001982直接结合miR-143-3p,作为其分子海绵调控miR-143-3p其靶基因IGF2R的抑制作用,同时抑制了胰岛素下游经典信号传导途径引起的。据此我们可以推测过表达circ₀001982或许是改善MetS患者胰岛素抵抗的有效方法之一。更多还原