一株鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的种类鉴定

【作者】 黄奕蔓； 白津铭； 朱文倩； 李峰； 黄桂香； 廖咏梅；

【机构】 广西大学农学院；

【摘要】 鸡蛋花锈病是鸡蛋花的重要病害,其病原菌为鸡蛋花鞘锈菌(Coleosporium plumeriae),感染锈病的鸡蛋花叶片背面出现黄色隆起的粉状夏孢子堆,叶片正面有淡黄色小斑点,影响其观赏价值,严重时叶片提前脱落。2020年在广西南宁市上林县的一个自2003年以来从未施用化学药剂的茶园——万古茶园,发现鸡蛋花锈病叶片背面的夏孢子堆被白色的霉状物覆盖,在光学显微镜下镜检发现,这些霉状物为具分隔的菌丝体和大量椭圆形或近球形、单胞无色的分生孢子,被菌丝体覆盖的鸡蛋花鞘锈菌夏孢子堆中,可见有菌丝体自夏孢子中长出,夏孢子由黄色变为透明、其边缘由完整变为破碎。在扫描电子显微镜下,被霉状物覆盖的夏孢子皱缩变瘪,而正常夏孢子饱满。可见,覆盖在鸡蛋花鞘锈菌上的白色霉状物为该锈菌的重寄生真菌。挑取少量鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的菌丝体置于PDA培养基上,在28℃培养7 d,可见菌落白色,直径28～40 mm,菌落正面稍凸起、有皱褶,气生菌丝质地紧密,菌落背面黄色;分生孢子梗菌丝状单生,分生孢子呈头状聚生在分生孢子梗顶端,分生孢子呈椭圆形或近球形,单胞无色,大小(0.5～1.0)μm×(0.9～1.2)μm。提取鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌代表菌株单孢分离菌株PR-CPH1的总DNA,用真菌通用引物ITS1/iTS4、SSU基因的NS1/NS4引物和LSU基因的NL1/NL4引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。在NCBI的GenBank数据库中进行BLAST比较,结果发现菌株PR-CPH1的ITS序列(MW505984)、SSU序列(MW505988)和LSU序列(MW505987)与Simplicillium subtropicum的相应片段序列(ITS-AB603990、SSU-LC496895和LSU-LC496880)的同源性分别为99.00%、98.11%和98.11%。下载GenBank上发布的Simplicillium属主要真菌种类的iTS、SSU和LSU序列,三个片段联合(ITS-SSU-LSU)后,利用MEGA 6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining method,N-J法)构建系统发育树,发现菌株PR-CPH1与Simplicillium subtropicum(strain JCM18180)的三个片段(AB603990-LC496895-LC496880)联合序列的遗传距离最近。根据Kenichi等(2013)对Simplicillium subtropicum的形态特征描述及ITS、SSU和LSU联合序列的系统发育分析,鉴定菌株PR-CPH1为Simplicillium subtropicum。Simplicillium subtropicum的分类地位为子囊菌门(Ascomycota)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草菌科(C ordycipitaceae)、单梗霉属(Simplicillium)。有关Simplicillium subtropicum的研究,仅见Anoumedem等(2020)报道,从番荔枝科(Annonaceae)的一种植物(Duguetiastaudtii)中分离得到内生真菌Simplicillium subtropicum,从中提取得到的两种化合物Simplicilones A和B对宫颈癌细胞株KB3.1有轻微毒理作用。未见Simplicillium subtropicum是植物病原菌重寄生真菌的报道,也未见鸡蛋花鞘锈菌重寄生现象的报道。本研究发现的鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌(Simplicillium subtropicum)为首次报道。更多还原