凤梨释迦黑星病病原菌的初步鉴定

【作者】 蓝达愉； 舒芳玲； 秦小芳； 林纬； 黎起秦； 袁高庆；

【机构】 广西大学农学院；

【摘要】 凤梨释迦(Annona atemoya Hort.)又称蜜释迦,为番荔枝科(Annonaceae)番荔枝属(Atemoya)中的一种多年生果树,具有重要的经济价值,近年来在广西东南部和沿海地区种植面积不断扩大,呈规模化种植趋势。近几年来,在广西南宁市发现一种凤梨释迦叶部病害发生普遍,严重时病叶率达到65%左右。受害叶片首先出现针尖大小的黑褐色斑点,随后扩展形成近圆形小黑斑,直径1～3 mm,病斑中央稍凹陷,边缘多有黄晕,靠近支脉处病斑分布更加密集。主脉和支脉亦可受害,形成黑色条斑。病斑后期出现小黑点即分生孢子器,大量产生时触摸有粗糙感。多个小病斑可愈合形成不规则形大斑,致叶肉组织坏死、叶片提早脱落。采集典型病叶,利用常规组织分离法分离得到6个菌株。在28℃下PDA培养基上培养,菌落白色呈羽毛状,具有同心轮纹,后期菌丝颜色加深呈黄白色。在燕麦培养基上28℃培养7 d后开始形成小黑点即分生孢子器,15 d后形成成熟的分生孢子。所分离菌株都可产生甲型和乙型两种分生孢子。甲型分生孢子呈纺锤形,大小为(6.94～8.97)μm×(2.31～3.87)μm,两端多具两个油球。乙型分生孢子呈线性,大小为(20.76～31.84)μm×(1.05～2.01)μm,一端微弯曲。扩增6个菌株的rDNA-ITS、β-微管蛋白(β-TUB)和翻译延伸因子(TEF-1α)基因序列,经NCBI数据库BLASTn比对分析,确定6个菌株均属于间座壳属(Diaporthe sp.),其无性型为拟茎点霉属(Phomopsis sp.)。选取两个有代表性的菌株在燕麦培养基上于28℃培养6d,用打孔器取5 mm的菌饼,以针刺法接种到健康的离体叶片上,以接种燕麦培养基为对照,然后置于28℃下保湿培养。4 d后,接种分离物的叶片上均出现黑色病斑,而对照处理中的叶片保持健康。通过组织分离法分离发病部位的病原真菌,获得的分离物与原接种菌株的形态特征一致。研究结果表明,凤梨释迦黑星病是由拟茎点霉属真菌引起,其分类地位有待进一步明确。更多还原