猪链球菌ssnA基因缺失突变菌株的构建及毒力分析

【作者】 李淼； 李春玲； 宋帅； 杨冬霞； 蔡汝健； 李艳； 蒋智勇； 勾红潮； 楚品品；

【机构】 广东省农业科学院动物卫生研究所； 广东省兽医公共卫生公共实验室； 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室；

【摘要】 <正>引言猪链球菌2型（SS2）是一种重要的人畜共患病病原菌,能够引起猪及人的关节炎、脑膜炎及败血症^[1]。目前国内外缺乏对SS2毒力因子和致病机制的全面了解。分泌型核酸酶基因ssnA是近年来研究发现的一种脱氧核糖核酸酶,被认为是一种SS2潜在的毒力因子^[2]。本研究为了分析ssnA基因对于SS2毒力的影响,构建了SS2流行毒力株GD01的ssnA基因缺失突变菌株,并通过比较分析了野生菌株与缺失突变株的生物学特性。材料与方法SS2菌株GD01由本实验从发病猪体内分离、鉴定并保存;温度敏感型自杀载体pSET4s由日本的Takamatsu博士惠赠^[3]。以SS2分离株GD01基因组DNA为模板,分别扩增ssnA基因上游序列P1和下游序列P2;以穿梭质粒pSET3为模板,扩增CmR基因盒序列,定向以P1-Cm-P2的顺序连接到温敏型自杀性载体质粒pSET4S中,更多还原