生物素化苯砷酸探针用于HepG2细胞中砷结合蛋白分析

【作者】 南凯； 陈贝贝； 何蔓； 胡斌；

【机构】 武汉大学化学与分子科学学院生物医学分析化学教育部重点实验室；

【摘要】 三价砷可以与蛋白质中半胱氨酸上的巯基形成As-S键,进而对细胞功能产生影响。这种影响一方面可以用来治疗急性早幼粒白血病;另一方面会干扰细胞功能,引起生物毒性。因此研究细胞中的砷结合蛋白对于了解砷元素的生理功能具有重要意义。目前砷结合蛋白分析的主要手段是采用亲和色谱。最近,乐晓春等[1]设计了一种小分子砷探针p-Azidophenylarsenoxide用于原位捕获A549细胞中的砷结合蛋白。结果显示,小分子砷探针在胞内结合了多种与细胞生理活动相关的蛋白质。本工作建立了一种基于生物素化苯砷酸探针(Bio-PAO(III))探针分析HepG2细胞内砷结合蛋白的新方法。首先将所合成的Bio-PAO(III)探针与HepG2细胞共孵育,Bio-PAO(III)进入细胞后原位捕获砷结合蛋白,之后将细胞裂解,采用链酶亲和素磁球捕捉Bio-PAO(III)-砷结合蛋白复合物,然后结合凝胶电泳和液相色谱-高分辨质谱联用技术,实现了HepG2细胞内砷结合蛋白的分析。更多还原