微小隐孢子虫TSP7蛋白质通过硫化肝素介导子孢子对HCT-8细胞的黏附

【作者】 王东强； 张天宇； 高鑫； 焦新； 张楠； 陆慧君； 朱冠； 尹继刚；

【机构】 人兽共患病研究教育部重点实验室吉林大学人兽共患病研究所；

【摘要】 微小隐孢子虫属于顶复门原虫,是导致人和动物腹泻的主要病原之一。目前对该虫的致病机理尚不清楚。肝素类糖胺聚糖分子是一类重要的黏附受体,其能够显著抑制虫体对宿主细胞的黏附入侵。本研究对微小隐孢子虫TSP7蛋白质作为研究对象,对其进行亚细胞定位和相关黏附功能研究。首先制备了抗TSP7单克隆抗体,通过Western blot鉴定抗体的特异性,用该抗体对TSP7的分布进行亚细胞定位。通过荧光定量PCR的方法,对TSP7基因在不同发育阶段的转录水平进行分析。然后制备重组蛋白,通过Western blot、间接免疫荧光、流式细胞术三种试验方法评价其与HCT-8细胞的黏附情况。再通过Pull-down方法鉴定重组蛋白的肝素结合活性。最后通过荧光定量PCR的方法体外评价单抗对虫体入侵的影响。结果表明,抗TSP7单抗能够特异性识别大小为125 KDa的虫体天然蛋白。TSP7蛋白质位于微小隐孢子虫子孢子与裂殖子表膜。TSP7基因在各时期均有转录,但在虫体入侵HCT-8细胞12h时转录水平达到最高。重组蛋白能够特异性结合HCT-8细胞和肝素。单抗能够显著阻断虫体入侵HCT-8细胞,抑制率达到48%。表明TSP7通过细胞表面的硫化肝素结合HCT-8细胞,介导虫体黏附和入侵。更多还原