小麦病程相关蛋白PR-10的原核表达、纯化和抗血清的制备

【作者】 时兴； 李畅； 王颖； 张宗英； 李大伟； 于嘉林； 韩成贵；

【机构】 中国农业大学植物病理学系农业生物技术国家重点实验室；

【摘要】 病程相关蛋白(Pathogenesis-related proteins,PR)是一类受到生物胁迫和非生物胁迫而产生的抗病抗逆蛋白,共分为17个家族,其中PR-10家族具有核酸酶活性、抑菌活性及抗病毒的功能。小麦黄花叶病由小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)侵染引起,导致小麦减产。由于受到传毒介体禾谷多黏菌、气候、栽培条件等诸多因素影响,防治困难。PR-10蛋白已经被证实能够增强谷类作物的耐胁迫性。因此,利用转基因技术获得转PR-10基因小麦,探索是否可以实现对小麦黄花叶病的防控,具有一定的研究价值。为检测PR-10基因的表达,本文制备了小麦PR-10的抗血清。首先通过RT-PCR的方法获得小麦病程相关蛋白PR-10基因,再将PR-10基因克隆到原核表达载体pDB.His.MBP上,转化大肠杆菌BL21 (DE3)。经过0.1 mmol/L的IPTG诱导、超声破碎和Ni亲和层析柱纯化,得到质量较好总量约4mg的PR-10融合蛋白。然后将融合蛋白作为抗原免疫健康的新西兰白兔,制备并获得抗血清。最后,利用该抗血清对原核表达的融合蛋白以及在本生烟瞬时表达的小麦PR-10蛋白进行了Western-blot检测,结果显示该抗血清能与PR-10蛋白发生特异血清学反应。更多还原