基于肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD的间接ELISA检测方法的建立

【作者】 朱悦； 李求春； 焦新安；

【机构】 江苏省人兽共患病学重点实验室农业部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学；

【摘要】 【目的】建立检测鸡源非伤寒沙门菌(NST)抗体的间接ELISA方法,为鸡源非伤寒沙门菌的诊断与流行病学研究提供技术手段。【方法】构建原核表达重组质粒pET30a(+)-nmpC,将其转化至受体菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和包涵体变复性获得高纯度的重组蛋白His-OmpD。以重组蛋白His-OmpD为包被抗原,建立以肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD为包被抗原的间接ELISA检测方法,通过常规的方阵滴定实验确定包被抗原的最佳包被浓度和血清的最佳工作浓度。利用SPF鸡的阴性血清确定了该方法的阴阳性临界值。【结果】成功构建了重组表达质粒pET30a(+)-nmpC-BL21(DE3),经Westernblot鉴定分析,获得的重组蛋白His-OmpD具有良好的免疫反应性。以His-OmpD为包被抗原,经过方阵滴定确定抗原的最佳包被浓度为1μg/m L,抗体的最佳稀释度为1:160,阴阳性临界值为0.38。【结论】通过构建重组原核表达载体,利用包涵体变复性收获到了纯度较高的重组蛋白His-OmpD,所建立的以肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD为包被抗原的检测方法能够特异性的检测出鸡源非伤寒沙门菌的抗体。更多还原