鸡白痢沙门菌在细胞中SCV的形成规律

【作者】 王鑫； 夏颉； 李求春； 焦新安；

【机构】 江苏省人兽共患病学重点实验室农业部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学；

【摘要】 【目的】探究鸡白痢沙门菌在禽细胞中形成SCV的规律。【方法】利用鸡肝癌上皮细胞系LMH、禽巨噬细胞系HD-11两种细胞系,选用5min、15min、30min、45min、60min、5h六个时间点,用激光共聚焦显微镜观察早期、中期、晚期SCV相关标记蛋白与鸡白痢沙门菌C79-13的空间分布及互作情况,研究鸡白痢沙门菌在禽上皮细胞和禽巨噬细胞中形成SCV的规律。【结果】在LMH中,鸡白痢沙门菌在侵袭5min时开始招募早期标记蛋白EEA1,形成早期SCV。侵袭15 min时,开始招募中期标记蛋白Rab7和Lamp1。其中,在侵袭30 min时招募Rab7蛋白的比例最高,略高于侵袭15 min时,侵袭45 min时最低;在侵袭15 min时细菌招募Lamp1的现象最为明显,侵袭30 min时Lamp1的招募率略微下降。侵袭30-45 min时,仅少数细菌开始招募成熟期标记蛋白Cathepsin D,但Cathepsin D招募现象在侵袭60 min时尤为明显,在细菌侵袭5 h后,仅有53.67%的细菌招募Cathepsin D。在HD-11中,鸡白痢沙门菌在侵袭5min、15 min和30 min时,EEA1始终未被招募,但存在对细菌的包裹现象,并形成了明显的空泡结构,且细菌在这种空泡结构内的比例随时间呈现上升趋势。在侵袭15 min、30 min和45 min时,Rab7同样始终未被招募且出现了和EEA1相似的包裹现象,且空泡结构随时间同样呈现上升趋势,在45 min时已有64.28%的细菌被Rab7包裹。相对于EEA1与Rab7不被细菌招募却包裹细菌的现象,Lamp1(中期SCV)与Cathepsin D(晚期SCV)却未观察到这种现象。且在30-60 min时,仅有部分细菌招募Cathepsin D,比例随时间逐步下降,在5h时,细菌完全不招募Cathepsin D。【结论】根据激光共聚焦观察结果可知,鸡白痢沙门菌在鸡肝癌上皮细胞系LMH中,5 min开始形成早期SCV,15 min开始形成中期SCV,根据Cathepsin D招募结果推测,30-45 min晚期SCV开始形成,60 min晚期SCV最为显著;在禽巨噬细胞系HD-11中,5 min开始形成早期SCV,15 min开始形成中期SCV,根据Cathepsin D招募结果推测,30min晚期SCV开始形成。但是在禽上皮细胞和禽巨噬细胞中SCV的形成现象存在差异,上皮细胞中EEA1与Rab7存在被细菌招募的现象,而在巨噬细胞中,细菌只被EEA1与Rab7包裹,这可能与不同细胞类型有关。更多还原