旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫时期排泄分泌抗原的对比分析与鉴定

【作者】 孙尧； 王艳凤； 赵静； 丁静； 孙召金； 王楠； 刘菁； 刘明远；

【机构】 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室；

【摘要】 旋毛虫病是由旋毛虫引起的食源性人兽共患寄生虫病。虫体通过旋毛虫抗原的变异来逃避宿主免疫效应的攻击。其中,排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen,ES抗原)的蛋白成分可干扰宿主免疫识别,通过调节或逃逸宿主免疫反应而达到寄生目的。研究表明,旋毛虫肌幼虫ES蛋白是诊断旋毛虫病最主要的诊断抗原,但不同旋毛虫种肌幼虫所分泌的ES蛋白存在差异,给旋毛虫病的诊断和预防带来困难。因此,研究不同种旋毛虫肌幼虫时期共同和特异性ES蛋白对旋毛虫病的诊断具有重要意义,有助于实现旋毛虫病的种间无差别或种间特异性诊断。目的本研究旨在通过对比两个可感染人的旋毛虫种肌幼虫ES抗原蛋白中的差异组分,从而鉴定差异蛋白和抗原成分,期望为旋毛虫病致病机制研究和种间特异性诊断奠定基础。方法通过优化实验条件建立适合旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫ES蛋白的双向电泳技术体系;进行双向荧光差异电泳实验,并利用Decyder 2D软件对凝胶图谱进行分析;将筛选出的差异蛋白点进行质谱鉴定;利用双向凝胶电泳免疫印迹法分析两旋毛虫亚种肌幼虫ES的组分差异性,并对差异组分进行质谱鉴定。结果得到分辨率较高的旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫ES蛋白双向荧光差异电泳图谱;筛选出42个差异表达的蛋白点,质谱成功鉴定出其中31个蛋白点的成分;根据双向凝胶电泳免疫印迹法与质谱鉴定发现旋毛虫T1肌幼虫ES蛋白中存在的特异性抗原有:脱氧核糖核酸酶家族II蛋白抗原和p49蛋白抗原等;旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫ES蛋白中共同存在的蛋白或抗原有:p43糖蛋白,Tpp SP-1蛋白,45kDa抗原,丝氨酸蛋白酶等。结论分析和鉴定结果表明某些差异蛋白存在翻译后修饰,研究表明这些蛋白可能具有种间特异性修饰作用;旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫ES抗原中共有组分和特异组分可能作为旋毛虫病种间无差别或种间特异性诊断分子标志物,并为后续旋毛虫病相关药物的研发提供了潜在的理论基础。更多还原