转铁蛋白修饰脂质-聚合物纳米载体递送吉非替尼靶向EGFR通路治疗脑胶质瘤的实验研究

【作者】 王臻； 肖勇； 赵梦洁； 邹元杰； 肖红； 刘宏毅；

【机构】 南京脑科医院神经外科；

【摘要】 目的构建靶向EGFR通路递送吉非替尼(Gefitinib, Ge)的纳米载体TfPEG2000-DSPE-PLGA/Ge,克服血脑屏障、抑制EGFR酪氨酸激酶磷酸化和EGFR刺激的细胞增殖。方法 1. Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge纳米药物的制备及表征:(1)通过TEM观察纳米药物的形态;(2)Malvern Zetasizer Nano检测Tf-PEG2000-DSPEPLGA/Ge纳米载体粒径和电位大小;(3)ELISA检测Tf-PEG2000-DSPEPLGA/Ge负载Ge的能力。2.细胞水平检测:(1)通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测U87细胞摄取Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge纳米药物的能力;(2)运用EdU实验检测Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge抑制U87胶质瘤细胞增殖的作用。3.动物水平检测:(1)构建稳转荧光素酶的U87细胞原位裸鼠脑胶质瘤模型;(2)活体成像仪检测Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge能否将Ge递送至脑胶质瘤组织内并实现有效地聚积;(3)活体成像仪监测治疗后U87原位裸鼠模型的肿瘤荧光强度的变化;(4)记录裸鼠原位模型体重及生存曲线变化。4. TfPEG2000-DSPE-PLGA/Ge在裸鼠体内的生物安全性评价:(1)通过急性毒性试验检测纳米药物的肝肾毒性;(2)血常规检测其血液相容性;(3)通过分析心、肝、脾、肺、肾等主要器官的病理切片,研究其体内累积毒性。结果 1. Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge纳米药物的制备及表征:(1)透射电镜下Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge呈均匀分布的球形结构;(2)水力学直径呈正态分布,空载体Tf-PEG2000-DSPE-PLGA粒径为80.10±4.22 nm,包载Ge时粒径为86.17±3.14 nm;对应的电位分别为-15.4 mV、-20.23 mV。(3) TfPEG2000-DSPE-PLGA/Ge的Ge包封率为9.57%。2.细胞水平检测:(1)激光共聚焦显微镜和流式细胞仪结果显示:Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge纳米药物可有效靶向脑胶质瘤并被高效地内吞进入肿瘤细胞;(2) EdU结果表明:TfPEG2000-DSPE-PLGA/Ge抑制U87细胞增殖效果显著(P<0.05)。3.动物水平检测:(1)稳转荧光素酶的U87裸鼠原位胶质瘤模型构建成功;(2)活体成像仪证实Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge纳米药物脑靶向良好,可有效通过血脑屏障,在胶质瘤组织中高效地聚积(P<0.01);(3)通过治疗后裸鼠肿瘤的荧光强度的变化,我们发现Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge能够有效抑制U87脑胶质瘤细胞的增殖,各组之间差异具有统计学意义(P<0.05);(4) Tf-PEG2000-DSPEPLGA/Ge实验组裸鼠体重下降最缓慢,中位生存期较对照组明显延长,证明了Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge能够显著抑制脑胶质瘤的增殖。4. Tf-PEG2000-DSPE-PLGA/Ge纳米药物对小鼠无急性全身毒性作用,血液相容性好,心、肝、肺、肾脏器切片并未出现组织损伤和形态改变。结论构建了靶向性抑制EGFR通路的纳米药物Tf-PEG2000-DSPEPLGA/Ge,具有显著的抑制脑胶质瘤增殖的效果。更多还原