H₂S对蛛网膜下腔出血后的保护作用和脑脊液炎症指标与预后关系的研究

【作者】 王贞；

【机构】 山东大学基础医学院；

【摘要】 目的研究H₂S对蛛网膜下腔出血（Subarachnoid hemorrahge,SAH）后神经保护作用及其机制,检测SAH患者脑脊液（Cerebrospinal fluid,CSF）中H₂S合成酶的含量及其与炎症因子的相关性。方法将实验动物随机分为四组:假手术组（Sham）,假手术组+NaH S,SAH组,SAH+NaHS组,其中NaH S作为H₂S的直接供体,分别于SAH发生后2h、6h、24h和46h,通过腹腔注射的方式给予SAH大鼠。在SAH后48h处死动物,通过HE染色观察各组前额叶皮层、海马的水肿、坏死等表现,透射电镜下观测神经元结构,TUNEL染色检测神经元的凋亡情况,NeuN/cleaved caspase-3荧光双标检测凋亡信号分子在神经元中的激活情况,逆转录PCR技术（RT-PCR）和Western blot检测Bax,Bcl-2的表达,在SAH后7天利用Morris水迷宫检测其学习记忆能力。在动脉瘤破裂所致SAH患者48小时内收集脑脊液样本,Western检测CSF中的胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthase, CBS）,3-巯基丙酮酸巯基转移酶（mercaptopyruvate sulfurtransferase, 3-MST）和d-氨基酸氧化酶（d-amino acid oxidase, DAO）水平,检测白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的水平,在术后6个月回访并评估预后。结果 Sham组相比,SAH组神经元明显坏死,细胞与细胞器的正常结构和形态消失,caspase-3被广泛激活,应用NaH S后可以抑制SAH大鼠神经元中caspase-3的激活,降低其表达水平从而抑制细胞凋亡。SAH组Bax与Bcl-2表达发生改变,Bax/Bcl-2比值显著上升,而NaH S处理后降低Bax/Bcl-2比值。同时NaH S处理后可明显改善SAH诱导的学习记忆障碍。在正常人的CSF样本中,可以检测CBS和DAO的表达,而其在SAH后明显升高。在正常人的CSF中未发现3-MST,而在SAH后其表达升高。SAH后第2天CBS,3-MST,DAO与升高的IL-6存在显著的相关性。此外,SAH患者CSF中高水平CBS,3-MST和DAO与SAH6个月后的不良预后相关。结论 H₂S可以通过抑制神经元凋亡,减轻早期脑损伤,降低死亡率,改善神经行为障碍。SAH后CBS,3-MST和DAO表达增加与炎症反应密切相关,可能是导致SAH预后不良的原因。更多还原