柳杉愈伤组织的初步诱导

【作者】 董京； 徐进； 施季森；

【机构】 南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室；

【摘要】 柳杉为杉科柳杉属,是我国特有的用材树种,柳杉既是良好的园林风景树种,对保护环境也起到重要的作用。愈伤组织培养是植物细胞工程技术的最基本内容。愈伤组织可以作为许多试验的研究材料,本研究旨在筛选柳杉愈伤组织诱导的最佳培养基配方,为柳杉无性繁殖的提供技术平台。已有实验表明,在杉木科植物中,茎尖诱导形成的愈伤组织团应大小适当,结构致密,呈瘤状突起,转移到分化与增殖培养基中,能在愈伤组织上分化出不定芽。本研究以柳杉011号优良无性系的茎、叶、芽3种外植体为材料,6-BA、2,4-D两种生长激素和谷氨酰胺、水解酪蛋白作为配方因子,采用L9(34)4因素3水平的正交试验设计,对基本培养基及激素浓度配比进行了相关的研究,结果表明:(1)基本培养基的筛选:选取了DCR,1/2DCR,MS,1/2MS,WPM这5种基本培养基对柳杉愈伤组织进行诱导,发现它们的诱导率都较高,但存在一定差异,其效果依次是:改良DCR> MS>1/2DCR>1/2MS>WPM。但从愈伤组织的外形看,DCR培养基所诱导的愈伤组织都呈现质地坚硬,白色,表面圆润的状态,而MS培养样基诱导的愈伤组织大都是质地松软,淡黄色偏白,透明,有针状突起,则最佳的培养基为改良DCR培养基。不同外植体对愈伤组织诱导的影响:选用不同外植体对于愈伤组织的诱导存在差异性。在本研究中发现,柳杉的针叶面积过小,虽能诱导出愈伤组织,但诱导愈伤组织的时间长,且愈伤体积小;芽诱导出愈伤组织时,不易脱分化且较易玻璃化;而茎在不同浓度下均有部分愈伤组织诱导出来,在最佳激素浓度配比下,愈伤诱导率较高,体积较大;因此,茎部是诱导柳杉愈伤组织的最适宜外植体。(3)激素浓度配比对愈伤组织诱导的影响:本实验中对不同激素浓度组合的研究中发现,6-BA浓度范围0.1-1mg/l,2,4-D浓度范围1-4mg/l,水解酪蛋白浓度范围400-600mg/l,谷氨酰胺浓度范围400-600mg/l,肌醇范围0-4.0g/l均能诱导柳杉愈伤组织,但不同浓度激素组合的培养基诱导效果不同,试验中发现诱导愈伤组织的培养基的激素组合为:6-BA 0.5mg/l,2,4-D 1.0mg/l,水解酪蛋白500mg/l,谷氨酰胺600mg/l,肌醇2g/l,其诱导的柳杉愈伤组织愈伤体积最大,褐化最少且诱导周期较短,效果最佳。更多还原