结核分枝杆菌脂蛋白Z调节固有免疫应答的功能研究

【作者】 肖佳妮； 陈颖盈； 季萍； 王树军； 王颖；

【机构】 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所；

【摘要】 目的:巨噬细胞作为结核分枝杆菌(M.tb)感染宿主的主要媒介免疫细胞,具有识别与吞噬M.tb的功能。本研究旨在解析结核分枝杆菌脂蛋白Z (LppZ)参与调节固有免疫应答的功能,为阐明结核分枝杆菌与宿主免疫系统间的相互作用分子新机制提供理论依据。方法:本实验利用小鼠Air Pouch模型和巨噬细胞系分析了LppZ对固有免疫应答的体内外调节作用,包括采用MPO测试和流式细胞术分析LppZ注射不同时间(4h和24h)后小鼠背部皮下空泡中招募固有免疫细胞的格局变化;以不同浓度的LppZ (0、1、5、10μg/ml)刺激小鼠RAW264.7细胞系,在不同时间点(4h和24h)用ELISA方法检测培养上清中促炎因子的分泌情况,同时用流式细胞术检测RAW264.7细胞表面共刺激分子的变化情况。结果:小鼠Air Pouch实验显示,无论是注射后4h或24h,LppZ组招募的总细胞数均显著高于羧甲基纤维素(CMC)对照组,p值分别为0.0125和0.0005,具有显著差异。进一步分析空泡中招募细胞中固有免疫应答细胞的比例,发现处理4h后,LppZ组空泡内招募细胞以中性粒细胞为主;但是在处理24h后LppZ组空泡内固有免疫应答的细胞组成由中性粒细胞转化为巨噬细胞。将LppZ体外刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7后,与无抗原刺激组相比,不同浓度LppZ抗原刺激RAW264.7细胞4h和24h后,细胞培养上清中TNFα的水平均呈现剂量依赖性增加。LppZ处理24h后,细胞上清中还可以测到高水平的IL-6和IL-12p40,IL-6和IL-12p40的增加也均呈现剂量依赖性。同时,流式结果表明,与无抗原刺激组相比,LppZ可以在刺激24h后增强RAW264.7表面共刺激分子CD80和CD86的表达,CD80和CD86分子表达的提高也同样呈现剂量依赖性。结论:上述研究结果表明,结核分枝杆菌LppZ蛋白可以通过招募炎症细胞、诱导炎症因子的分泌,并提高巨噬细胞表面共刺激分子的表达,进而发挥增强固有免疫应答功能的作用,提示LppZ可以在抗结核过程中发挥潜在的免疫保护作用。更多还原