桑粉虱携带双生病毒（桑树皱叶病毒）的PCR检测

【作者】 柴建萍； 罗雁婕； 江秀均； 谢道燕； 黄平；

【机构】 云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所；

【摘要】 桑粉虱Pealius mori(Takahashi)属半翅目,粉虱科,是云南桑园重要害虫之一。桑粉虱以幼虫、成虫刺吸桑叶汁液危害,造成桑叶品质及产量下降。伴随云南桑园面积扩大及桑树种植品种多样化发展,桑皱叶花叶病毒病在部分植桑区陈年桑、新植桑园为害呈逐年加重势态。云南桑粉虱与桑皱叶花叶病的发生存在时空共性,但病与虫间是否存在关联仍属未知。本文应用桑树皱叶相关病毒MCLV(NCBI登陆号:KR131749)部分基因序列设计特异性引物CS/CA;将具有皱缩或萎缩黄化病症的云桑2号、农桑14号、垂枝桑(采自云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所)样本分别提取基因组DNA;将采自病症桑树上的桑粉虱成虫逐一单头提取基因组DNA,共计30头;应用CS/CA引物,以桑病样本基因组DNA、桑粉虱样本基因组DNA为模版分别进行PCR扩增,电泳检测获约750bp目的条带的PCR产物送样测序,DNAMAN软件进行序列拼接,并提交NCBI数据库Blast比对分析。结果:云桑2号、农桑14号、垂枝桑样本序列拼接得到707bp与MCLV相应片段相似性分别为98%、96%、99%,表明3种桑品种样本感染了桑皱叶病毒;30头桑粉虱样本(P1-P30)基因组DNA的PCR产物中的6个样本(P3、P4、P13、P16、P25、P29、)产生约750bp目的条带。样本P3、P13因存在高级结构,测序未获成功;样本P4、P16、P25、P29序列拼接(707bp)后与MCLV相应片段相似性分别为98%、97%、99%、97%,表明4头桑粉虱成虫携带桑叶皱叶病毒;比对桑树样本与桑粉虱样本(P4、P16、P25、P29)的病毒分离物核苷酸序列,其相似性为98.41%。桑树样本、桑粉虱样本(P4、P16、P25、P29)病毒分离物与MCLV对应氨基酸序列分别存在8个、5个位点差异。通过PCR检测分析表明,存在于病桑体内的皱叶病毒序列同样存在于桑粉虱体内,初步推测桑树皱叶病毒属于虫媒传播病毒,而桑粉虱可通过取食获毒,成为桑皱叶病毒携带者或传播媒介。更多还原