家蚕山梨醇脱氢酶基因特性分析

【作者】 朱娟； 谢雨辰； 陈艳荣； 唐顺明； 易咏竹； 沈兴家；

【机构】 江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室； 中国农业科学院蚕业研究所农业部蚕桑遗传改良重点实验室；

【摘要】 为了明确家蚕滞育关联基因山梨醇脱氢酶基因(Bm SDH)Bm SDH-1、Bm SDH-2a和Bm SDH-2b的特性,我们用5′RACE技术确定3个Bm SDH基因的转录起始位点;分别克隆3个Bm SDH基因约1kb及Bm SDH-2a不同长度的启动子区序列,构建带有萤火虫荧光素酶报告基因的载体pGL3-Bm SDH-P-luc,与pRL-CMV报告质粒(含海肾荧光素酶报告基因)共转染家蚕BmN细胞,并分别在培养基中添加昆虫保幼激素、蜕皮激素和滞育激素;通过双荧光素酶检测系统检测Bm SDH启动子活性,以及不同浓度的激素处理对Bm SDH-2a基因启动子活性的影响。结果表明,Bm SDH-1的转录起始位点为A(-41),Bm SDH-2a的转录起始位点为C(-41),Bm SDH-2b的转录起始位点为A(-40)(翻译起始位点为+1);Bm SDH-2a启动子活性极显著高于Bm SDH-1和Bm SDH-2b启动子;Bm SDH-2a 355 bp长度片段的启动子转录活性极显著高于674bp和1117bp长度片段;用不同浓度滞育激素处理,Bm SDH-2a 1117 bp启动子活性随着激素浓度的升高有上升的趋势,当浓度高于100ng/mL时启动子活性有所降低但仍保持在较高水平;用保幼激素进行处理时,随着激素浓度的升高启动子活性逐渐降低;蜕皮激素处理时,100 pg/mL激素增强启动子活性,当激素浓度继续升高时则启动子活性逐渐降低。研究结果有助于阐明BmSDH基因在家蚕滞育中的功能。更多还原