基于调控机制构建雷帕霉素高产基因工程菌株

【作者】 张晓元； 郝荣华； 刘飞； 陈勉； 凌沛学； 张岱州； 张兰英；

【机构】 山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室； 山东大学药学院； 山东福瑞达医药集团有限公司；

【摘要】 利用生物信息学同源性分析吸水链霉菌基因组中链霉菌属抗生素合成调控基因,发现存在正调控基因afsR及分化负调控基因nsdA高度同源序列。全基因合成吸水链霉菌类afsR、rapG、rapH等正调控基因、类nsdA负调控基因序列,分别连接到pSET152或pKC1139表达载体,CaCl2法转入大肠杆菌ET12567(pUZ8002)中,并利用接合转移转入吸水链霉菌Y-807中,经PCR检测、检定菌抑菌圈初筛和HPLC定量检测,筛选产量最高的基因工程菌株H-036。Western杂交显示afsR、rapG、rapH的过量表达及nsdA负调控基因的敲除,促进了雷帕霉素的生物合成,有效提高了雷帕霉素的发酵产量。经发酵条件优化,雷帕霉素基因工程菌株H-036最高产量达1260.27 mg/L,较出发菌株提高125.13%以上。该方法为雷帕霉素工业化菌株改造提供了数据及理论支持。更多还原