BCL3基因在白血病细胞生长中的作用和机制研究

【作者】 杨雪； 牛玉娜； 王辉；

【机构】 新乡医学院河南省免疫与靶向药物重点实验室； 新乡医学院医学检验学院；

【摘要】 研究背景:B细胞淋巴瘤因子3基因(B-cell CLL/lymphoma 3,BCL3)最初发现于B淋巴细胞白血病,与慢性B细胞白血病及多种实体瘤相关。我们的前期研究发现BCL3在急性髓细胞白血病中表达,其表达水平与生存期短有关,然而BCL3对白血病细胞的调控作用和机制尚不清楚。研究方法 :使用CRISPR/Case9技术制备BCL3敲除的K562细胞,使用RNA技术对K562细胞系进行BCL3干扰,用Q-PCR与Westernblot技术检测BCL3的敲除及干扰效率,使用CCK-8法、Ki67标记法、克隆形成实验、穿膜实验和流式细胞术等检测BCL3敲除/减对白血病细胞生长、增殖、迁移和周期等多种生物学行为的影响。使用Western blot检测周期相关蛋白的变化,免疫共沉淀和共聚焦荧光显微镜检测BCL3与Stat3的相互作用。研究结果 :在HeLa细胞中过表达BCL3与stat3,经免疫共沉淀和共聚焦显微镜检测证明外源BCL3与stat3有直接相互作用,随即我们在K562细胞系中也证实内源性BCL3与Stat3的结合。流式细胞术和CCK-8增殖实验检测结果显示,K562细胞系中BCL3的敲除/减对白血病细胞生长、增殖有明显促进作用,且对白血病化疗药物的敏感性提高。Ki67标记法和流式细胞术结果显示,K562细胞系中BCL3的敲除/减促使Ki67表达水平升高,证明白血病细胞的增殖活性增高。Western blot技术检测BCL3敲除/减的K562细胞周期蛋白,与对照相比,BCL3敲除/减细胞系Stat3蛋白总量不变,磷酸化Stat3及p21与p27水平明显降低。结论 :本研究通过CRISPR/Case9技术及RNA干扰技术直接对BCL3基因进行敲除/减,发现K562细胞系中BCL3基因表达明显受到抑制,验证了CRISPR/Case9技术及RNA干扰的有效性。BCL3敲除/减的白血病细胞的增殖活性明显高于对照组,证明BCL3基因与白血病细胞的增殖活性密切相关,敲除和RNA干扰BCL3基因表达能显著促进白血病细胞增殖活性。更多还原