减毒重组李斯特菌治疗性疫苗诱导HPV16 E7抗原特异性的细胞免疫应答研究

【作者】 王玉婷； 贾艳艳； 殷月兰； 焦新安；

【机构】 江苏省扬州大学生物科学与技术学院；

【摘要】 减毒单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为一种革兰氏阳性兼性胞内寄生菌,不仅能刺激机体产生强烈的天然免疫应答,同时又能诱导特异性CD8+T细胞免疫应答和CD4+T细胞免疫应答,是一种理想的肿瘤疫苗载体。宫颈癌是引发发展中国家妇女高死亡率的一个主要原因,严重影响了全球女性健康,人乳头瘤病毒(Human papilloma virus, HPV),特别是16型,是导致宫颈癌的主要基因型。它所编码的E7蛋白被认为是宫颈癌肿瘤特异性抗原,因此该蛋白常作为靶点用于HPV防治研究,已成为当前宫颈癌免疫治疗的重要研究方向之一。因此,我们以减毒LM作为运送载体,成功地构建了稳定分泌表达HPV16 E7蛋白的重组疫苗株。利用同源重组技术将HPV16 E7基因定点整合至LM hly基因信号肽序列下游,获得减毒重组李斯特菌LM4△hly::E7,分析了该重组菌的生物学特性,探究了该候选疫苗抗肿瘤的预防性和治疗性效果及其机制。研究结果表明重组菌能够分泌表达具有免疫学活性的E7-LLO融合蛋白,同时能够诱导小鼠产生E7特异性抗体,通过组织切片观察到重组菌对小鼠肝脏及脾脏无明显病理变化。本研究构建的分泌表达E7-LLO融合蛋白的减毒重组李斯特菌具有较好的安全性。LM4Δhly::E7在小鼠腹膜内的疫苗接种显著减少肿瘤大小,甚至导致宫颈癌小鼠模型中已建立的肿瘤完全消退。LM4Δhly::E7通过诱导机体脾脏内产生的CD8+T细胞及CD4+T细胞数量的增多,有效地诱导荷瘤小鼠产生强烈的特异性Th1型免疫应答及特异性CTL杀伤活性,并且通过刺激肿瘤组织细胞胞内活性氧及Ca2+水平的升高,直接杀伤肿瘤细胞,在宫颈癌小鼠肿瘤模型中显示出较好的预防性效果和治疗性效果。LM4Δhly::E7通过诱导产生抗原特异性的细胞免疫应答和直接杀死肿瘤细胞的抗肿瘤作用,潜在应用于宫颈癌治疗。为宫颈癌的疫苗研发提供了新思路、新途径和新材料,同时为LM载体运送其它外源抗原的研究提供重要借鉴意义。更多还原