呼和浩特地区籽用西葫芦白粉病病原鉴定

【作者】 李书颉； 王萍； 杨永升； 于晓婧；

【机构】 内蒙古农业大学园艺与植物保护学院内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室；

【摘要】 2018年7—8月在呼和浩特地区的籽用西葫芦生产大田采集白粉病病叶,将采集回来的籽用西葫芦白粉病病菌经Koch法则检验。用灭菌的镊子取白粉病菌分生孢子于载玻片上,加入1滴3%的KOH溶液盖上盖玻片,在10×40倍显微镜下观察孢子的形态,包括大小、形状、是否具有纤维状体。白粉病菌DNA的提取方法为用消毒的解剖针轻轻挑取50个左右的分生孢子至灭菌的载玻片上,盖上盖玻片轻轻研磨,至分生孢子全部破碎。吸取50μL Chelex-100(5%)与所有磨碎的孢子混匀,将混合液转移到1.5μL的离心管中,5 000 r·min-1离心1 min;放入56℃恒温水浴锅中水浴20 min后,5 000 r·min-1离心1 min;放入100℃水浴锅中水浴8 min,取出后漩涡混匀,最后15 000 r·min-1离心1 min;放入4℃冰箱中用于PCR扩增或保存在–20℃冰箱中备用。PCR反应体系50μL:ITS序列选取3对引物(5′–3′)ITS5/P3;PM5/ITS4;LUS1/LUS2。扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行双向测序,用MEGA6.0对测得序列与从GenBank中下载的相关序列进行比对分析。籽用西葫芦白粉病主要侵染寄主叶片,发病前期为白色粉状菌斑,发病后期叶片布满白色粉末状病菌。在显微镜下观察发现,白粉病菌分生孢子均呈椭圆形,大小为(27.32～31.80)μm×(11.46～18.20)μm,分生孢子梗呈圆柱形,具有成串的分生孢子,并且分生孢子中含有纤维状体。根据孢子梗和分生孢子的形态特征,初步其为单囊壳白粉病菌Podosphaera xanthii。经过PCR产物测序得到籽用西葫芦白粉病菌ITS序列大小为441 bp,在NCBI中的GenBank对ITS序列和其他同源序列进行比对分析其同源性,与单囊壳白粉病菌Podosphaera xanthii(登录号:MG928388)的同源性为99%。选择部分BLAST比对结果,并以高氏白粉菌属Golovinomyces下的5个种为外群,作出籽用西葫芦白粉病菌的系统发育树。将所得序列进行BLAST对比分析发现,呼和浩特地区的籽用西葫芦白粉病菌BF1与美国纽约马鞭草白粉病菌(登录号为AB046985)和日本非洲紫罗兰白粉病菌(登录号为AB040339)等亲缘关系较近,序列保守性较强,聚在1个进化亚支上。通过分子鉴定可以初步判断呼和浩特地区籽用西葫芦白粉病菌属于P. xanthii。结合形态观察与分子鉴定可以判断呼和浩特地区籽用西葫芦白粉病菌属于Podosphaera xanthii。更多还原