IBAP新型功能型分子标记技术的开发和应用

【作者】 熊发前； 刘俊仙； 刘菁； 贺梁琼； 蒋菁； 唐秀梅； 黄志鹏； 吴海宁； 钟瑞春； 韩柱强； 唐荣华；

【机构】 广西农业科学院经济作物研究所；

【摘要】 本研究首次开发出了一种新型功能型分子标记技术-基于内含子扩增多态性(intron based amplifled polymorphism,IBAP),该技术根据真核生物基因组中基因内含子区域富含AT设计并合成单引物,提取样品基因组DNA作为模板,利用设计好的单引物和所提取的样品DNA模板在常规PCR反应体系和PCR反应程序下(退火温度为35℃)进行扩增,扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离,检测单引物在基因组基因内含子区域中的两个结合位点间的多态性;其中,所用单引物的序列长度为17bp,5′端的6个碱基填充序列为富含GC碱基的限制性内切酶酶切位点序列或富含GC碱基的随机序列,中间核心区序列是由8个AT碱基随机排列组成,这14个碱基组成核心序列,最后3′端是3个选择性碱基。基于此引物设计原理,设计了32条单引物并应用于花生(24份)、水稻(16份)、玉米(11份)、甘蔗(24份)、马铃薯(9份)、木薯(5份)、菜心(16份)等多种农作物的遗传多样性分析和DNA多态性检测上,甚至在不同真菌上也得到了成功的扩增,该技术具有操作简单高效、扩增结果可靠、扩增重复性较好、扩增效率高、扩增条带数多、多态性丰富、引物设计简单、引物通用性强等特点,该技术已获授权国家发明专利1项。这些为下一步花生及其它作物种质资源的分子精准鉴定和评价提供了一定技术支持,值得大力推广应用。更多还原