油菜甜菜碱醛脱氢酶在拟南芥中过量表达增强耐旱性

【作者】 柴靓； 李浩杰； 张锦芳； 崔成； 蒋俊； 郑本川； 蒋梁材；

【机构】 四川省农业科学院作物研究所；

【摘要】 本研究用RT-PCR技术从甘蓝型油菜中克隆出油菜甜菜碱醛脱氢酶基因（BnBADH-1）全长。测序析结果表明,BnBADH-1的cDNA全长1 506bp,核酸序列与拟南芥BADH基因的相似性为90.24%。利用片段两端的粘性末端酶切位点BamHⅠ和SacⅠ将BnBADH-1片段连接在真核表达载体pBI121上。通过PCR及酶切鉴定确认过量表达载体pBI121-BnBADH-1已成功构建。将载体pBI121-BnBADH-1经由农杆菌介导的花序浸染法导入拟南芥。在T₀中挑选出3个阳性植株,自交2代得到T₂纯合的转BnBADH-1拟南芥（B1、B2和B3）。用不同浓度用甘露醇（mannitol）加入MS固体培养基来模拟不同程度的干旱胁迫。将B1、B2、B3和野生型WT种子分别铺在MS、MS+100mmol/L mannitol、MS+200mmol/Lmannitol培养基上,25℃/16h光照下培养。:MS培养基上种子萌发7d后,观察植株发现:①在普通MS培养基上,转基因B1、B2、B3植株与WT在出芽率、根长、叶绿素等方面无差异;②在MS+100mmol/Lmannitol培养基上,B1、B2、B3植株完全出芽而WT出芽率为85%;3个转基因株系根长均比MS上短,但都比同样处理下WT长;叶绿素含量高于WT;③在MS+200mmol/Lmannitol培养基上,转基因植株和WT的出芽率、根长、叶绿素都进一步下降,但转基因植株均高于WT。也就是说,在不同程度的干旱胁迫下,转BnBADH-1拟南芥种子的出芽率及幼苗根长、叶绿素含量均强于WT。即BnBADH-1基因的过量表达增强了拟南芥对干旱胁迫的耐受性。更多还原