益气活血方调节自噬及逆转肝纤维化机制的研究

【作者】 王宝玉； 赵文； 牛学敏； 杜静华； 付娜； 赵素贤； 王洋； 王荣琦； 张玉果； 南月敏；

【机构】 河北医科大学第三医院中西医结合肝病科；

【摘要】 目的探明自拟益气活血方在四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化动物模型中调节肝脏自噬及阻止肝纤维化的作用及其机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠,以30%CCl4橄榄油溶液腹腔注射建立肝纤维化模型,分别以益气活血方和扶正化瘀复方冲剂灌胃进行干预实验,以正常饮食设立对照组。全自动生化仪酶法检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;HE、Masson染色观察大鼠肝组织纤维化程度;免疫组织化学检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和I型胶原α1链(alpha-1type I collagen,Col1A1)蛋白的表达;qRT-PCR和Western blot检测肝组织α-SMA、Col1A1、自噬蛋白7 (Autophagy-relatedgene7,Atg7)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及泛素结合蛋白(SQSTM1/p62)mRNA及蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验,P<0.05为有统计学意义。结果模型组大鼠ALT及AST水平均明显异常(分别为106.80±18.24,278.4±66.14),肝组织病理学呈现肝小叶内点、灶状肝细胞坏死及窦周纤维化,汇管区扩大、纤维组织增生形成假小叶(S5.64±0.22),肝纤维化相关基因α-SMA、Col1A1及肝脏自噬相关基因Atg7、LC3B的mRNA及蛋白表达均显著增高,而p62表达显著降低(vs对照组,P均<0.001);应用益气活血方和扶正化瘀复方组大鼠血清ALT及AST水平较模型组显著降低(分别为66.8±10.42&73.2±10.33,122.6±16.65&125.4±16.92,F值分别为31.672和25.539,P均<0.001),肝纤维化程度亦明显减轻(分别为S3.70±0.35,S3.90±0.34,vs模型组,F值为362.188,P均<0.01),肝纤维化及自噬相关基因a-SMA、Col1A1、Atg7、LC3B表达显著抑制(P<0.01),而p62表达明显增高(P<0.05),尤以益气活血方效果明显。结论益气活血方和扶正化瘀复方均可通过调节肝脏细胞自噬,抑制肝星状细胞活化及胶原沉积,阻止或逆转肝纤维化。更多还原