水中诺如病毒检测方法的建立与优化

【作者】 宋士利；

【机构】 杭州余杭区疾病预防控制中心；

【摘要】 【目的】建立水中诺如病毒的病毒浓缩检测方法,并对所建方法进行评价;同时应用建立的方法对余杭区水中诺如病毒分布进行初步研究。【方法】建立水中诺如病毒浓缩方法包括三部分内容:通过优化反应体系建立荧光定量PCR检测诺如病毒的方法;对微孔滤膜吸附法、改良氯化钙吸附过滤法、氯化铝絮凝沉淀法等三种方法进行比较;对微孔滤膜吸附法进行评估和优化,并应用PEG6000、超滤管超滤、透析袋、冻干等方法对其产物进行第二次病毒浓缩;【结果】三种方法比较后,微孔滤膜吸附法病毒回收率最高。对微孔滤膜吸附法优化后的结果发现,调节水样PH值达到3.0时,应用3%PH9的牛肉膏浸出液进行洗脱,病毒回收率最高。对五种二次浓缩方法比较发现,PEG6000-Na₂PO₄最适合本实验室。使用优化后的方法分别对诺如病毒和肠道病毒模拟样品进行检测,计算方法的检测灵敏度。第一次病毒浓缩对肠道病毒浓缩的灵敏度为20copy/μl,对诺如病毒浓缩的灵敏度为30 copy/μl,第二次病毒浓缩对肠道病毒浓缩的灵敏度为2copy/μl,对诺如病毒浓缩的灵敏度为3 copy/μl。综合第一次和第二次的浓缩结果,建立MFM-PEG方法。【结论】本研究建立了一种较灵敏的水中诺如病毒浓缩方法,并且为了提高检出效率,进行了二次浓缩。更多还原