环境内分泌干扰物筛查方法的建立

【作者】 王丹； 陆葵青； 包骐林； 胡景清； 宋杰； 周明明； 周林桦； 李云；

【机构】 四川大学华西公共卫生学院营养食品卫生与毒理学系； 四川大学华西第二医院临床营养科；

【摘要】 目的本研究旨在研究一种基于人源性的甲状腺激素受体α/β(TRα/β)的荧光素酶报告基因试验系统,筛查内分泌干扰化学物(EDCs)。方法采用瞬时转染的方法,将甲状腺激素受体表达质粒、受甲状腺激素反应元件(TRE)调控的报告基因、相应的内参质粒共转染到受体阴性的恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中,构建基于pGL3-promega和pGL4.27的TRα/β的报告基因试验,并用T3(三碘甲状腺氨酸)、T4(甲状腺氨酸)检验报告基因试验系统的反应活性。结果基于pGL3-promega的TRα的报告基因试验无明显萤火虫荧光素酶(Luc)表达,基于pGL4.27的TRα的报告基因试验中T3诱导倍数高于对照组,但无明显剂量-效应关系。基于pGL3-promega的TRβ和基于pGL4.27的TRβ的报告基因试验中:T3、T4有最低检测限,能产生比对照组更大的诱导倍数。结论本研究建立的TRα的报告基因试验系统未取得理想结果,还需要进一步完善试验;建立的基于pGL3-promega和pGL4.27的TRβ的报告基因试验都有较高的灵敏性,基于p GL4.27的TRβ的报告基因试验灵敏性更高,可以用来初步筛查内分泌干扰化学物。更多还原